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水平板凝胶电泳是指在水平方向放置的凝胶平板中进行的电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉...
这就要看设置的层高或是怎样调整的标高,两者是不能有重叠的。
还是选中再重新三点定义标高,定义的一样就成水平的了
实验聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳 原理 一 聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis, 简称 PAGE),由称盘状电泳。 这种电泳是在区带电泳的基础上, 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物, 采用电泳 基质的不连续体系(即凝胶层的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、 pH 的不连续性及 电位梯度的不连续性) ,使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带(厚度为 10-2cm),然后再进行电泳分离。 圆盘电泳名称来源即由于此法的原理是依靠基质的不连续性( discontinuity ),凑巧在垂 直柱形凝胶上分散出的区带也很象圆盘状( discoid shape),取“不连续性”和“圆盘状”的 英文字头“ disc”。因此英文名称为“ disc electrophoresis”,中文直译为盘状电泳。 仪器装置:如 图 A 所示,上下两个
斜坡上封闭式水平板波浪上托力分布试验研究
通过系列模型试验,对斜坡上尾部封闭式平板结构波浪上托力沿板宽分布进行了详细分析,提出板下最大冲击压强和最大总上托力并不一定同时出现,其分布形态可分为局部冲击型和均匀型。由于封闭空气层和底部斜坡影响,较大总上托力形成机理不尽一致,其均匀分布宽度也不相同,可分为气压型和反射型两类,由此提出分类标准,并分别得到压强分布的计算公式。
聚丙酰胺凝胶电泳
中性聚丙烯酰胺凝胶电泳
安装电泳装置和配制凝胶溶液
凝胶电泳被广泛用于分子生物学、遗传学和生物化学:1.大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)分离,也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。2.蛋白质的凝胶电泳通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行(SDS-PAGE),或者非变性凝胶电泳,或二维电泳。 SDS-PAGE 蛋白质凝胶电泳图。 3.毛细管电泳 4.酶谱
法(zymography) 5.变性梯度胶凝电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE) 琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。
琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定:
1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。
2、 琼脂糖浓度
一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
3、DNA分子的构象
DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而开环双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。
双向差异凝胶电泳(two dimension difference gel electrophoresis, 2D-DIGE)是一种新出现的荧光标记的定量蛋白质组学技术,比经典的2-DE具有更高的动力学范围和灵敏性。DIGE系统基于荧光差异凝胶电泳。
(2D.DIGE)技术,是利用电荷和分子量的差异分离蛋白质混合物,并通过多通道激光扫描分析不同蛋白质的第二向SDS-PAGE凝胶图像。DIGE系统结合了新型荧光技术、样品多路技术(sample multiplexing)和图像分析等特有的技术,是一套优于经典的2-DE的完整的系统。DIGE系统的工作流程图见图示。