试剂

(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):

Na2CO3 1.59克

NaHCO3 2.93克

加蒸馏水至1000ml

(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15M

KH2PO4 0.2克

Na2HPO4·12H2O 2.9克

NaCl 8.0克

KCl 0.2克

Tween-20 0.05% 0.5ml

加蒸馏水至1000ml

(3) 稀释液:

牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

加洗涤缓冲液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。

(4) 终止液(3M H2SO4):

蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。

(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):

0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml

0.1M柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml

加蒸馏水50ml。

(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:

TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml

底物缓冲液(PH5.5) 10ml

0.75%H2O2 32μl

(7) ABTS使用液:

ABTS 0.5mg

底物缓冲液(PH5.5) 1ml

3%H2O2 2μl

(8) 抗原、抗体和酶标记抗体。

(9) 正常人血清和阳性对照血清。

器材

(1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。

(2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。

(3) 4℃冰箱，37℃孵育箱。

试验原理

试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

自备材料

1. 蒸馏水。

2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3. 振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

4. 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7. 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

9. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

10. 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

11. 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。