利用带有sop片段的表达载体克隆大肠杆菌色氨酸合成酶基因，构建得到稳定的色氨酸工程菌MIA60（pDWD60）。在摇瓶培养条件下，MIA60菌的色氨酸合生型菌株高16倍。SDS-PAGE结果表明，色氨酸合成酶占全菌可溶性蛋白的37%。营养条件对工程菌的质粒稳定性有明显影响，并与宿主有关。但是在不同营养条件下，对不同宿主菌，带有sop片段的重组质粒经150代培养后，保持均为100%。使用2.6升发酵罐对工程菌进行分批培养和补料分批培养时，带有sop片段的工程菌的质粒保持率均为100%。以上结果表明，sop片段可以单独在pMB1复制子控制下，对带有外源基因的重组质粒起到很强的稳定作用，不需要oriS的存在，也不需要ccd基因和repD基因的协助。这对于利用sop片段作为稳定因子构建的工程菌走向实用化具有重要意义。 2100433B

基于可靠度的抗风设计是结构风工程理论发展的重要方向，而概率性评价则是构建结构抗风可靠度理论的前提和基础。由于大跨空间结构的风荷载和风效应的复杂性，目前相关研究工作尚处于空白状态。本项目拟采用理论研究、风洞试验和原型实测相结合的方法，对大跨空间结构的极值风荷载和极值风振响应的概率分析方法及概率分布特征进行系统研究，探讨各种不确定性因素的生成机理和传递机制，建立相应的概率描述模型，提出适用于主体结构和围护结构的设计风荷载概率性评价方法，给出具有确定保证率的设计风荷载；在此基础上，对上述研究成果进行集成，构建更为完备的大跨空间结构风荷载数据库系统。以上工作为揭示大跨空间结构的风致关键效应机理提供了有效的途径，为进一步构建基于可靠度理论的空间结构抗风设计方法奠定了坚实的基础。

大跨屋盖结构的抗风问题具有多荷载形态、多响应振型和多等效目标的特点，这种复杂性导致各种不确定因素对于结构风效应的影响更为显著。本项目以大跨屋盖结构为研究对象，从理论、实验等多方面开展系统的风效应不确定性研究，提出了基于概率的结构抗风设计方法。主要工作有： 1、构建结构风效应不确定性研究的理论框架。确定以概率相关系数检验法和极大似然估计法对结构风效应各阶统计量的概率分布拟合优度进行定量评价，建立最优概率分布模型；以参数灵敏度分析方法定量评估各种不确定因素对结构风振响应不确定性的贡献率，获得不确定性在风荷载与风振响应间的传递规律；采用基于极值理论的估计方法计算具有确定保证率的极值风荷载和风振响应。 2、大跨屋盖风荷载的不确定性分析。对若干典型大跨屋盖刚性模型进行了重复采样风洞试验，通过对风荷载各阶统计量进行不确定性分析，建立了相应的概率描述模型。研究发现，正态分布和对数正态分布是脉动风压前3阶统计量的最优分布，广义极值分布是峰度系数的最优分布。还对峰值因子法的荷载保证率进行了评估，发现峰值因子法无法给出具有一致保证率的极值风压分布，且可能低估最不利负压20%~30%左右。 3、空间结构风振响应的不确定性分析。应用Sobol’方差分解法对结构进行了参数灵敏度分析，定量评估各种不确定因素对风振响应不确定性的贡献率，研究发现：①风振响应的不确定性主要受风荷载不确定性控制；②风振响应的参数灵敏度与共振响应在总响应中的比重有关，共振响应越大，结构对风荷载越敏感。 4、提出具有确定保证率的围护结构设计风荷载分析方法。提出了针对较小容量样本的概率分析方法-“改进独立风暴法”，其基本思路是设定某一荷载阈值，将连续超出该阈值的时段记为一个独立脉冲，将每个独立脉冲的最大值作为一个极值样本进行概率分析。由于样本抽取时保证了各脉冲极值的独立性，且各独立脉冲的形成机制具有较好的一致性，因此应用这一方法可对较小容量样本获得较为精确的概率模型。 5、提出具有确定保证率的主体结构设计风荷载分析方法。针对大跨屋盖结构多振型参振、等效目标众多的特点，提出一致等效静风荷载分析方法，其基本思想是：分别建立多目标等效方程组和约束方程组，前者的目的是获得与各等效目标吻合程度最好的解，后者的目的是限制某些奇异荷载作用模式的出现，从而解决了多目标等效问题，使主体结构设计风荷载在整体上具有一致的保证率。 2100433B