利用带有sop片段的表达载体克隆大肠杆菌色氨酸合成酶基因,构建得到稳定的色氨酸工程菌MIA60(pDWD60)。在摇瓶培养条件下,MIA60菌的色氨酸合生型菌株高16倍。SDS-PAGE结果表明,色氨酸合成酶占全菌可溶性蛋白的37%。营养条件对工程菌的质粒稳定性有明显影响,并与宿主有关。但是在不同营养条件下,对不同宿主菌,带有sop片段的重组质粒经150代培养后,保持均为100%。使用2.6升发酵罐对工程菌进行分批培养和补料分批培养时,带有sop片段的工程菌的质粒保持率均为100%。以上结果表明,sop片段可以单独在pMB1复制子控制下,对带有外源基因的重组质粒起到很强的稳定作用,不需要oriS的存在,也不需要ccd基因和repD基因的协助。这对于利用sop片段作为稳定因子构建的工程菌走向实用化具有重要意义。 2100433B