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三维荧光光谱则是由激发波长(y轴))一发射波长(x轴)一荧光强度(z轴)三维坐标所表征的矩阵光谱(Excitation-Emission-Matrix Spectra)，也叫总发光光谱 (Total luminescence Spectra)。通常的荧光光谱是荧光强度对发射波长扫描所得的平面图。很显然，三维荧光光谱技术不仅能够获得激发波长与发射波长，同时能够获取变化时的荧光强度信息。三维荧光光谱图一般有三维投影图和等高线荧光光谱图这两种表示方式。
