组培材料:选四年生盆栽的一年生茎段。
培养条件:所用培养基及激素为:
⑴MS 6-BA0.2毫克/升。 NAA0.5毫克/升 2,4-D0.75毫克/升 尿素60毫克/升;
⑵MS 6-BA3.5毫克/升 NAA0.3毫克/升 2,4-D0.8毫克/升;
⑶MS 6-BA3.5毫克/升 IBA0.5毫克/升 NAA0.5毫克/升 尿素80毫克/升;
⑷MS 6-BA2毫克/升 NAA0.05毫克/升 IBA0.05毫克/升 LH50毫克/升 VC5毫克/升;
⑸MS 6-BA3毫克/升 NAA0.2毫克/升 LH80毫克/升 VC40毫克/升 AC1.5克/升;
⑹MS 6-BA0.2毫克/升 NAA0.2毫克/升 IBA0.1毫克/升;
⑺MS 6-BA0.5毫克/升 NAAI IBA0.1毫克/升;
⑻MS KT0.3毫克/升 IBA0.2毫克/升 2,4-D1.8毫克/升。
培养基中蔗糖⑴为3.5%,⑵、⑻为4%,⑸为2.5%,其余均为3%;琼脂0.7%;pH5.7。培养温度为24℃-28℃;光照时间14小时/天,光强在起始和继代培养时为20-32纳摩尔/平方米秒,生根培养时为40纳摩尔/平方米秒。
诱导培养:3月中旬,采取绒柏树冠中上部茎段,用水洗净,切成3-5厘米长的茎段,用70%酒精浸泡15秒,0.05%的氯化汞消毒7分钟,无菌水冲洗4次。切去少许外植体切口,然后切成0.6-1.0厘米长,接种于培养基⑴-⑸上,每瓶接种4-6个外植体。7-10天后,外植体萌动生长;经20天,培养基⑴上的外植体基部产生少许愈伤组织,每个外植体有3-5个丛生芽分化,培养基⑵、⑶上的正常生长,产生愈伤组织;培养基⑷、⑸上的则有针叶变态现象,基部产生棕褐色愈伤组织。
增殖壮苗培养:培养基⑴上的丛生芽和培养基⑵、⑶不定芽转接于培养基⑹上,正常伸长生长,基部很少产生愈伤组织,约30天后,直接生根培养。培养基⑷、⑸上的虽有针叶变态现象,但分化频率高、效果好,可作为增殖培养。其中培养基⑸的效果最好,颜色嫩绿,45天后,平均高为4.3厘米。4.3分化培养绒柏分化培养特征是有针叶变态现象,先为苞片状,后膨大为菜花状,至此试管苗不再伸长。培养基⑷、⑺上有此现象可重新转接于培养基⑸上,25天后,转接于培养基⑹上进行恢复培养,再转接于生根培养。
生根培养:将不定芽剪成1.5-2.0厘米的茎段,转接于培养基⑻上。12天后,明显伸长,基部有不定根突出;20天后有根长出;约40天,明显形成白色粗壮根,根长2-4厘米,生根率为85%左右。