材料类别:腋芽。
基本培养基为改良的WPM 培养基:
以水合硝酸钙[Ca(NO3)2-4H2O】684 mg·L (单位下同)、KNO3 190、CIoHI3FeN2NaO8 74.3和盐酸硫胺素0.1代替原WPM 培养基中的K2SO4、CaC12、FeSO 和乙二胺四乙酸钠(Na2EDTA)。诱导芽萌发及分化培养基:(1)WPM+ZT 0.5;丛生芽的诱导和增殖培养基:(2)WPM+ZT 2.0; 生根培养基:(3)l/2wPM+NAA 0.05。以上培养基均附加2.0% 蔗糖、6 g. 。琼脂,pH 5.8。培养温度(23~2)℃,光照12 h.d一,光照强度40~50 pmo1.m-2.S一。
无菌材料的获得
以当年生休眠枝条的腋芽为外植体,将外植体置于烧杯中,用自来水冲冼30min,再用洗衣粉液清洗5 min,在超净工作台上用75% 酒精浸泡30 S,无菌水冲洗2次,0.1%HgC12消毒8 min,无菌水冲洗5次,吸干水分。剥去芽鳞,切去基部的受损组织, 接种于诱导芽萌发的培养基(1)中。2周后开始萌发;5周后芽长成4-5 cm左右的新梢,侧芽同时也萌发出2个不定芽。
丛生芽的诱导和增殖
不定芽形成后, 不切割转接于培养基(2)上。经过4周培养,在不定芽基部长出许多小的不定芽, 形成不定芽丛。把丛生芽分割成2~3个为一丛的芽丛,转接到培养基(2)中进行继代培养,6周左右可继代增殖1次。
生根与移栽
取继代培养的芽苗转接于培养基(3)中,5周后基部可长出2 条1~1.5 cm长的不定根, 生根率78% 。培养2~3周,打开瓶盖,炼苗3 d,然后从培养瓶中取出,洗去根部培养基,移入蛭石和腐殖土(1:2)混合的基质中,保湿遮阴,成活率可达90% 以上。
越桔科属杜鹃花科越桔属植物,为多年生落叶或常绿灌木或小灌木树种, 与现在人工栽培的蓝莓是同科同属的植物。越桔是一种新兴的保健水果,在医药、化妆、食用色素和食品加工等方面有广泛用途。越桔果实深蓝色,抗氧化能力名列果蔬之首, 对防止人体细胞衰老、预防老年性疾病如心脏病、白内障、癌症、记忆力衰退具有特殊的功效, 因而被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。果实所含的花青素是迄今已被利用的最佳天然色素, 加工稳定性高, 色泽呈深红、紫红或蓝紫, 作为药物或高级化妆品的原料均具有十分广阔的前景。近几年,其鲜果和加工品风靡欧美等发达国家, 虽然价格昂贵但仍供不应求。北美地区的产量已远不能满足本地和国际市场的需求,为此荷兰、加拿大、澳大利亚、日本、智利等国家先后引种栽培,现已初具商品产量。我国具有丰富的越桔植物资源,特别是云南分布的种类约占全国的一半。云南越桔是西南地区特有种, 仅分布于云南和四川。采用组织培养技术,对保存我国的越桔种质资源和开发利用可能有一定的应用价值。