人工接种是栽培黑木耳成败的关键工序，也是新法栽培最大的特点。接种时间，一般以气温稳定在15℃以上，有利于黑木耳菌丝生长的时候。具体时间因各地气候条件不同而有差异，南方各省约在3~4月间。适当提早接种，有利早发菌，早出耳，同时早期接种气温低，可减少杂菌，害虫的感染。接种前，先将段木表面清洗，再放阳光下晒2~3小时后备用。人工接种常用的菌种有木屑菌种、树枝菌种和楔形木块菌种。接木屑和树枝菌种的，要用电钻或直径11~12毫米的皮带冲 打孔，穴探15~2厘米。一般纵向种穴间距离10~12厘米，横向种穴间距离为4~6厘米。如适当密植，把纵向种穴间距离缩短至6~7厘米，有利于发菌和提高产量。行与行的穴交 错成品字形或梅花形排列。木屑菌种要塞满穴，外加比接种穴直径大2毫米的树皮盖，盖平、盖紧，以防菌种干燥。接树枝菌种的，种木要与耳木平贴。打穴、接种、盖盖等要连续作业，以保持接种穴、菌种和树皮盖原有的湿度，才有利于菌种的成活。采用楔形木块菌种的，要用接种斧或木工凿，在段木上砍凿成45°角2厘米深的接种口，然后用小铁锤将楔形木块菌种打入接种口，锤紧、锤平。