即检验所获得的原生质体是否是真正的原生质体
(1)低渗胀破法:把原生质体放入低渗透溶液中,在显微镜下观察原生质体从低渗溶液中吸水胀破的过程。如果是真正的原生质体,因为没有细胞壁,这样在胀破后留下的残迹应该是无形的。如果原生质体还带有部分细胞壁,则原生质体从无壁部分吸水向外膨胀直至胀破,破碎后留下的残迹仍保持半圆形的细胞壁。
(2)荧光染色法:将原生质体放入离心管中,加入0.7mol/L甘露醇配置的 0.05%~0.1%荧光增白剂溶液,染色5~10min,离心、洗涤除去多余的染料,在荧光显微镜下观察。绿色光显示纤维素的存在,发出红色光的是没有纤维素的真正的原生质体
检验原生质体是活细胞还是死细胞
染色法:
①二乙酸荧光素(FDA)法:FDA本来没有荧光,当其进入细胞后被脂酶分解为具有荧光的极性物,不能透过质膜,而是留在细胞内发出荧光。因此能发出荧光的是具有活性的原生质体。
②酚藏花红染料法:具有活力的原生质体吸收染料显红色;无活力的不能吸收染料而显示白色。
③伊文思蓝染色法:有活力的细胞不能吸收染料为无色;而没活力的细胞则能吸收染料显蓝色。
其他法:①胞质环流法②渗透压变化③氧电极法④形态观察法