1. 试剂每个批号均独立优化，请不要混用或稀释试剂以免降低敏感性;
2. 加入一抗后膜不能再干燥;
3. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要;
4. 使用前配置化学发光试剂，配置足够覆盖膜片即可，弃去使用过的混合试剂;
5. 使用干净取样头取用每种试剂;
6. 第一张片子建议曝光1分钟，观察结果后判断最佳曝光时间可从30秒至2小时不等;
7. 除了放射自显影片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作;
8. 膜片可经适当方法洗脱原有抗体，再次印迹使用，在此情况下，此试剂更为理想;
9. 因为它不象生色物质需要从膜片上清除底物。
10. nan3能抑制HRP活性，应避免使用nan3。
