双指示剂甲醛滴定法

(一)原理:氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量。

(二)试剂

(1)20%中性甲醛溶液，(以百里酚酞为指示剂，用0.1NNaOH溶液滴定呈淡蓝色)。

(2)0.1%百里酚酞95%乙醇溶液。

(3)0.1%中性红50%乙醇溶液。

(4)0.100N氢氧化钠标准溶液。

(三)操作步骤:

移取一定量(约含20毫克左右的氨基酸)样品溶液2份,分别置于250毫升锥形瓶中,加水50毫升;其中一份加3滴中性红指示剂，用0.100NNaOH溶液滴定至琥珀色为终点。另一份加入中性甲醛10毫升及3滴百里酚酞指示剂，摇匀，静置1分钟，(此时蓝色应消失)。再用0.100NNaOH溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算

计算:

氨基酸态氮(%)=((V1-V2)×N×0.014)×100/W

式中:

N:NaOH标准溶液当量浓渡。

V1:测定样品消耗NaOH标准溶液的体积(ml)。

V2:测定空白消耗NaOH标准溶液的体积(ml)。

W:样品溶液相当样品的质量(克)。

0.014:氮的毫克当量。

注意事项:

测定时样品的颜色较深，应加活性炭脱色之后再滴定。