SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳操作流程

1.将玻片装置搭建起来，加水静置，检查是否有渗漏。

2.配制分离胶 加入2玻片间，加时尽量减少气泡，由玻片一端连续、快速、均匀的注入，可适当摇晃，使得分离胶上界面尽量水平;加保护液(0.1% SDS)静置凝聚。加保护液时，枪头应均匀扫过玻片上沿，切不可由一端注入。

3.配制浓缩胶 待分离胶凝固后，去除保护液，依同样方法加入上层浓缩胶，并插入梳齿模具，静置。插入模具后，加少许浓缩胶，补平液面 。

4.配制电泳缓冲液，浓缩胶凝固后，玻片取下，放入电泳槽中，有凹陷玻片朝向内侧，并将玻片用夹子夹紧，在外侧玻片粘上凹槽指示薄片，取下梳齿，加入电泳缓冲液，平板内侧液面以刚没过凹槽上沿为宜。

5.样品处理 将待分析样品配制成合适的浓度或浓度梯度溶液，连同marker分装于Ep管中，并加入loading buffer ，100℃煮沸。此步可调至步骤3后做，一般4完成后不宜等待过长时间，最好立即加样、通电。

6.将样品液依次加入梳齿形胶孔中，每孔上样量10ul。

7.接通电源，设为恒流10 mA，待样品跑至分离胶界面后，调整电流为15 mA。

8.胶跑完后，固定(0.5h~)、染色(1.5h~)、脱色。