超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC)是分离科学中的一个全新类别,UPLC借助于HPLC(高效液相色法)的理论及原理,涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域,作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世,之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前,超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。
超高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法基本相同,所改变的地方有以下几点:
(1)小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 高效液相色谱的色谱柱,例如常见的十八烷基硅胶键合柱,它的粒径是5um,而超高效液相色谱的色谱柱,会达到3.5um,甚至1.7um。这样的孔径更加利于物质分离
(2)超高压输液泵的使用。
由于使用的色谱柱粒径减小,使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。
(3)高速采样速度的灵敏检测器。
(4)使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术;
(5)仪器整体系统优化设计。色谱工作站配备了多种软件平台,实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。
与传统的HPLC相比,UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍,它缩短了分析时间,同时减少了溶剂用量降低了分析成本。
不过由于实验过程中仪器内部压力过大,也会产生相对应的问题。例如泵的使用寿命会相对降低,仪器的连接部位老化速度加快,包括单向阀等部位零件容易出现问题等。
如今,超高效液相色谱仪主要应用于
(1)药物分析 如天然产物中复杂组分的分析
(2)生化分析 如蛋白质、多肽、代谢组学等生化样品
(3)食品分析 如食品中农药残留的检测
(4)环境分析 如水中微囊藻毒素的检测
(5)其他 如化妆品中违禁品的检测
超高效液相色谱仪尤其对中药研究领域的发展是一个极大的促进。中药的组分复杂,分离困难等问题都可以通过超高效液相色谱法逐渐解决。在同样条件下,UPLC能分离的色谱峰比HPLC多出一倍还多。在同样条件下,UPLC的分辨率能够认出更多的色谱峰。
相信在分析实验室中超高效液相色谱会越来越普及,让液相色谱法得到飞跃和进步。