青霉素溶液

称取青霉素钠(钾)适量，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解成每1ml中含青霉素1万单位的溶液。

青霉素酶稀释液

取青霉素酶溶液，按估计单位用磷酸盐缓冲液(pH7.0) 稀释成每1ml中约含青霉素酶8000~12 000单位的溶液，在37℃预热。

测定法

精密量取青霉素溶液50ml,置100ml量瓶中，预热至37℃后，精密加入已预热的青霉素酶稀释液25ml，迅速混匀，在37℃准确放置1小时，精密量取3ml，立即加至已精密量取的碘滴定液(0.01mol/L)[精密量取碘滴定液(0.1mol/L)10ml，置100ml量瓶中，用醋酸钠缓冲液(pH4.5)稀释至刻度]25ml中,在室温暗处放置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L) 滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失。

空白试验

取已预热的青霉素溶液2ml，在37℃放置1小时，精密加入上述碘滴定液(0.01mol/L)25ml，然后精密加青霉素酶稀释液1ml，在室温暗处放置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定。按下式计算:

E=(B-A)×M×F×D×100

式中

E为青霉素酶活力，(单位/ml)/小时;

B为空白滴定所消耗的上述硫代硫酸钠滴定液的容量，ml;

A为样品滴定所消耗的上述硫代硫酸钠滴定液的容量，ml;

M为硫代硫酸钠滴定液的浓度，mol/L;

F为在相同条件下，每1ml的上述碘滴定液(0.01mol/L)相当于青霉素的单位数;

D为青霉素酶溶液的稀释倍数。

[附注]

磷酸盐缓冲液(pH7.0)

取磷酸氢二钾7.36g与磷酸二氢钾3.14g,加水使成1000ml。

醋酸钠缓冲液(pH4.5)

取冰醋酸13.86ml,加水使成250ml;另取结晶醋酸钠27.30g,加水使成200ml，两液混合均匀。