1、微量测试孔:每条8孔,每板12条
2、氯霉素标准溶液:
0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05 ppb,1.5ml/瓶
3、96孔化学发光板×1块 (包被有偶联抗原)
4、标准液×6瓶:(1ml/瓶)
0ppb,1ppb,3ppb,9ppb,27ppb,81ppb
5、高浓度标准品:(1ml/瓶)1ppm
6、酶标记抗体
7、显色剂
8、20×浓缩洗涤液
9、2×浓缩复溶液
A、注意事项
1、使用前先将氯霉素标准溶液6瓶,浓缩萃取稀释液,浓缩洗涤液,酶标记物,底物溶液及微量测试孔条置于室温下,回温30分钟。
2、洗涤工作液
用去离子水将20×浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释 3、回温后,取出所需微量测试孔条,将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好,置于4o℃保存。
1.待测物为组织样本,则依以下方法进行处理
a.取3g样本、4ml蒸馏水与6ml 乙酸乙酯置入离心管中,震荡约5分钟,使其充分混合均匀。
b.离心10分钟(3000rpm),取4ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50℃下氮气吹干(温度请勿超过50oC)。
c.加入1ml萃取稀释液,震荡约10秒钟后备用。
C、操作步骤
本产品的酶标记物与氯霉素标准溶液均直接使用,无需再稀释。
1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前处理的样品溶液。
3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。
4、轻敲盘子四周,使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。
5、将微孔中的反应液甩掉,再将洗液加满每一微孔后甩掉,重复洗3次。
6、最后一次甩掉后,在吸水纸上拍干。
7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,轻敲盘子四周,使其充分混合。
8、于室温下避光静置温育20分钟。
9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。
10、用化学发光仪于下判读。
D、判定
1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。
2. 以B/B0值为纵坐标,以标样浓度的对数值为横坐标,做标准半对数曲线。
3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。
4. 由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
E、标准曲线
F、灵敏度
氯霉素试剂检测盒的平均检测下限为0.05ppb,此浓度之吸光值与阴性标准溶液(0ppb)之吸光值有明显的差异。
G、 特异性
针对以下抗生素进行交叉反应之测试,结果如下:
Chloramphenicol =100%
Chloramphenicol(free base) <0.1%
Gentamycin <0.1%
Tetracycline <0.1%
Penicillin G <0.1%
Sulfamethazine <0.1%
H、再现性
针对氯霉素检测试剂盒精密度测试,重复6次,所得不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(%CV).
I、回收率
组织(添加1.0ppb)104~117%