切取球茎时,先用手术刀刮去外层的鳞片,将底部削平,然后放于流水处冲洗0.5h,70%酒精浸泡5~8s,采用升汞二次消毒法:0.1%升汞+1~2滴吐温-80灭菌6min,无菌水冲洗2次,用无菌刀将消毒后的球茎切成上、中、下3个部分,每个部分切成约1cm×1cm×1cm的小块,切下的小块再用0.1%升汞+1~2滴吐温-80消毒1 min,无菌水冲洗6~8次,接种到培养基(MS+BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5)上。切取根时,先切去老的部分,用含少量洗洁精的水洗净污垢后,放置在流水处冲洗15min,用70%的酒精浸泡5s,0.1%升汞+1~2滴吐温-80消毒5min,用无菌水洗5~6次,再截成1~2cm,接种到培养基(MS+BA 0.5+NAA 0.1+2,4-D2.0)上
接种7d后,球茎的上部最早出现芽点,30d后,从上部中分化出的芽长势良好,分化率为92%,中、下部芽的分化率分别为21%和8%。根接种10d后开始膨大,然后逐渐在切口部位长出白色、紧密的愈伤组织,平均诱导率为82%,将愈伤组织从根上分离后接种到培养基(MS+BA 1.0+NAA0.1)上, 35d后愈伤组织上逐渐分化出绿色小芽点,分化率为87%。
待上面2种途径诱导得到的芽长到2cm 左右即可接种到培养基(MS+BA 2.0+NAA 0.1)上进行增殖培养,35 d 后诱导出大量丛生芽,增殖倍数为6.4,芽苗生长健壮。
当丛生芽长到约3 cm高时,将其分割转入培养基(1/2MS+NAA 1.0+IBA 0.5)上,10 d 开始生根,30d 时每株苗长出4~6 条白色粗壮的根,根尖为黄色,生根率为100%。
栽前,先将封口膜揭开一半,在人工气候箱中锻炼3d,然后将三角瓶移到光照较强的地方,封口膜全部揭去,炼苗3~4d。移栽时,用镊子小心地把苗从三角瓶中取出,洗净黏附在根部的琼脂,种植于已消毒的珍珠岩:蛭石(1:1)的基质中,慢慢地浇透水,移栽后第1个星期盖塑料膜保湿,成活率为95% 以上。