1、真空手套箱分为主箱体和过渡室两部分。主箱体不能独自抽真空，过渡室则能够独自抽真空。

2、先翻开过渡室里面的门，然后关上所有手套接口压盖、阀门和过渡室外的门。

3、翻开手套口之间的三通阀（逆时针旋转），将手套接口压盖与手套之间的空间接通箱体，使得抽气时手套表里（箱体和接口）一起抽真空，坚持两头气压平衡。

4、将真空泵接到过渡室一个阀门上，敞开真空泵，慢慢翻开此阀门，对系统抽气（如翻开阀门的速度太快，可能引起手套膨胀）。

5、待真空表指针下降并稳定在-0.1MPa时，抽真空完成，此刻应先关阀门再关真空泵。

6、然后经过另一阀门向箱体内充入惰性气体，直至气压比大气压（气压表指数为0MPa）略高一点，使箱体内、外的压力根本平衡，且内部略高于外部，可保证大气不会进入箱体内部（假如您想使箱体内的气体更纯净，最好将以上抽气和充气进程重复几回）。关掉衔接手套接口的三通阀，翻开手套接口上的压盖，就能够进行操作了。