狭叶龙舌兰主要通过无性繁殖的方式繁殖。由于其开花需10年以上，因此利用其开花之后的株芽进行无性繁殖所需周期太长。其走茎苗的数量也相对有限。采用除顶端优势获取钻芯苗方法的增殖系数也不高，且从钻芯到长出幼苗需数月时间，不足以满足园林绿化市场的需求。因此狭叶龙舌兰最好使用组培法繁殖。

外植体消毒：选取株高约10厘米的狭叶龙舌兰健康走茎苗作为外植体材料。将外植体剥去外叶后，用饱和十二烷基苯磺酸钠溶液漂洗5-15分钟，再用流动自来水冲洗20-30分钟。在超净工作台无菌条件下，用70%乙醇浸泡外植体1分钟，之后用无菌水冲洗2-3次，再用0.1%的升汞处理10-25分钟，期间不时振荡容器。最后用无菌水振荡冲洗3-5次。用灭菌吸水纸吸干水分。

诱导培养：将消毒处理后的外植体纵切2-4块，接种于不定芽诱导培养基，不定芽诱导培养基以SH培养基为基础，添加6-BA和NAA作为外源激素以及6.5克/升琼脂，30克/升蔗糖。其中6-BA浓度为1.0-4.0毫克/升，NAA浓度为0.1-1毫克/升，培养基的pH为5.8。培养条件为日光照时间12-14小时，培养温度27±2℃，光照强度2000勒克斯。培养结果显示，当6-BA浓度为4毫克/升，NAA浓度为0.2毫克/升时，丛生芽长势最好。

继代增殖培养：在不定芽诱导培养基培养35-40天后，将丛生芽纵切成含有1-2个芽的小块，转入丛生芽增殖培养基进行增殖培养。丛生芽增殖培养基以SH培养基为基础，添加外源激素NAA、6-BA和TDZ（噻苯隆），以及6.5克/升琼脂，30克/升蔗糖。

丛生芽增殖：以SH培养基为基础，丛生芽增殖培养基中添加的NAA的浓度为0-1毫克/升，6-BA的浓度为0.5-5毫克/升，TDZ的浓度为0-1毫克/升。并在培养基中添加6.5克/升琼脂和30克/升蔗糖，调节培养基的pH为5.8。在日光照时间12-14小时，培养温度27±2℃，光照强度2000勒克斯的条件下进行培养。

生根培养：在丛生芽增殖培养基培养25-30天后，切下高度3厘米以上的单芽，然后接种至生根培养基培养。以1/2MS培养基为基础，并在培养基中添加6.5克/升琼脂和30克/升蔗糖，调节培养基的pH为5.8。在日光照时间12-14小时，培养温度27±2℃，光照强度2000勒克斯的条件下进行培养。

移栽：将切下的单芽在生根培养基培养25-30天后，将培养瓶瓶盖拧松后放置于室外自然条件下8-12天，然后移出培养瓶并洗净基部残留的培养基，用70%托布津1000倍溶液浸泡1分钟，然后将幼苗假植在粗河沙:泥炭土=1:1，且预先用1%高锰酸钾消毒的苗床上。夏季需搭建荫棚，每天晚间淋水一次；冬季需覆盖薄膜保温。