组培材料:项芽和带侧芽的茎段。
培养条件:基本培养基为MS。
①启动培养基:MS 6-BA1.0毫克(单位下同) NAA0.1;
②增殖培养基:MS 6-BA0.8 IBA0.02;
③壮苗培养基:1/2MS 6-BA0.2 IBA0.1;
④生根培养基:1/2MS MA0.2。
以上培养基均加3%蔗糖和0.75%琼脂,pH5.8。培养温度为(25±2)℃,连续光照12小时/天,光照强度为30-40摩尔/平方米秒。
启动培养:从母株上切取带顶芽和侧芽的茎段,除去叶片,在洗衣粉洗涤液中浸5分钟,用软毛刷轻轻刷洗,再在流水下冲洗1小时,然后在超净工作台上,剥取项芽约1.5厘米长或将带芽茎段切成1.5厘米,放入75%的酒精中浸5-10秒,用无菌水冲洗3次,再用0.1%的升汞消毒10-15分钟,无菌水冲洗6次,吸干材料表面水分后,切去末端受升汞毒害褪色部分,切成1厘米左右的芽或带1个腋芽的茎段,接种到培养基①上。接种10天左右芽或茎段的基部开始膨大,30天后有的外植体已有不定芽生成,60天后形成部分丛芽。
增殖培养:将新生丛芽切成带2个芽的小块,接种到培养基②上,19天左右有丛芽生成,30天时,增殖系数达7.3。反复分切丛生芽,在培养基②中进行增殖培养,可以获得大量的丛生芽。
壮苗培养:将丛生芽转入培养基③中进行壮苗培养,20天后丛生芽逐渐长高长壮,叶片展开快速,同时丛生芽也会继续增殖。
生根培养:经壮苗培养的幼苗长至4厘米左右,带6张叶片时,将其沿茎基部剪断接入培养基④中进行生根培养。20天左右,小苗基部切口处长出4条根,根长达3-4厘米,生根率达90%以上。