外植体的选择:于4-7月采取生长健壮的二歧银莲花幼嫩茎段作外植体。
材料处理方法:先用软毛刷将二歧银莲花表面的灰尘轻轻刷去,用流水冲洗3分钟后用紫外灯照射20分种,转入超净工作台,在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡10秒,然后再转入滴加了2-3滴土温80的0.1%的氯化汞溶液中浸泡2-3分种,再用无菌水冲洗2-3次,最后在无菌条件下分割材料,茎段切割成0.6-0.8厘米长。
初代培养:在无菌的条件下将按上述方法处理得到的外植体接种在初代培养基上,该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了2.2毫克/升的2,4-D、0.8毫克/升的NAA、0.5毫克/升的GA,pH6.6,培养温度为24℃,光照周期小时/天,光强度为2300‑2500勒克斯,待新芽长至2.0厘米左右时,即开始下一个阶段。
增殖培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上,该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了2.2毫克/升的2,4-D、0.8毫克/升的NAA、0.5毫克/升的GA,pH6.6,培养温度为24℃,光照周期13小时/天,光强度为2300‑2500勒克斯,待新芽长至2.0厘米时,即开始下一个阶段。
生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上,该培养基是在MS常规培养基中添加了2.4毫克/升的IAA、0.5毫克/升的NAA,1.5毫克/升的组合,pH6.6,培养温度为24℃,光照周期13小时/天,光强度为1900勒克斯,待新苗长至2.0厘米时,即开始下一个阶段。