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抑制消减杂交技术主要缺陷

2022/07/16189 作者:佚名
导读:① SSH技术需要较多的起始材料且更多地依赖于PCR技术,若是mRNA量不够,低丰度的差异表达基因cDNA可能检测不到 ② 消减库中的cDNA经过Rsal等限制酶消化后,不再是全长cDNA ③ 不能同时对多个材料之间进行比较,材料之间存在过多的差异及小片段缺失也不能有效被检测 ④完全无酶切位点的片段或酶切位点较少的基因组无法用SSH技术筛选 ⑤ 利用抑制消减杂交所获得的片段,须经过Nothern杂

① SSH技术需要较多的起始材料且更多地依赖于PCR技术,若是mRNA量不够,低丰度的差异表达基因cDNA可能检测不到

② 消减库中的cDNA经过Rsal等限制酶消化后,不再是全长cDNA

③ 不能同时对多个材料之间进行比较,材料之间存在过多的差异及小片段缺失也不能有效被检测

④完全无酶切位点的片段或酶切位点较少的基因组无法用SSH技术筛选

⑤ 利用抑制消减杂交所获得的片段,须经过Nothern杂交或反Nothern杂交来进一步鉴定,去除假阳性。

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