选取三叶青的枝条为当年生半木质化茎段，去除叶片后剪成5-10厘米的茎段，用去污剂清洗10分种后，再用流水冲洗10分种；将剪切冲洗后的三叶青茎段于体积分数为75%体积分数的乙醇水溶液中浸泡30-60秒，再于氯化汞水溶液中浸泡5-8分种；最后用无菌水冲洗3-5次后备用。在培养条件为22-25℃，光照强度为300-1000勒克斯，光照时间为11-13毫克/升；其中，所述的固体培养基的配方包括：6-苄氨基嘌呤0-1.0毫克/升 蔗糖25-30克/升 琼脂4.5-6克/升 土豆汁60-80克/升 活性炭0.5克/升 MS培养基 pH5.6-5.8之下；把处理后的三叶青茎段剪成带1-2个腋芽的小段，接种于固体培养基中；培养40-50天后腋芽萌发，摘取芽长1-2厘米的腋芽备用。

在培养条件为25-28℃，光照强度为1000-2000勒克斯，光照时间为11-13毫克/升；其中，所述的增殖继代培养基的配方包括：6-苄氨基嘌呤0-1.0毫克/升 萘乙酸0-0.5毫克/升 土豆汁60-80克/升 蔗糖25-30克/升 琼脂4.5-6克/升 活性炭0.5克/升 MS培养基 pH5.6-5.8之下；把所得的腋芽置于增殖继代培养基中培养50-60天；培养完成后，三叶青腋芽生长成无根小苗且在茎节处产生侧芽。

在培养条件为25-28℃，光照强度为1000-2000勒克斯，光照时间为11-13毫克/升；其中，所述的壮苗生根培养基的配方包括：萘乙酸0.2-0.5毫克/升 蔗糖25-30克/升 香蕉汁60-80克/升 琼脂4.5-6克/升 活性炭0.5克/升 White培养基 pH5.6-5.8中。把所得三叶青无根小苗剪成带1个腋芽的小段并移至壮苗生根培养基中培养50-60天，得到三叶青成苗。