组培外植体采集:选取野外生长健壮的山木通植株中上部带两个侧芽的茎段为外植体,采集后保水保湿处理并及时带回实验室。
不定芽诱导:将采集回实验室的外植体用自来水下冲洗10小时,置于超净工作台中于75%的乙醇溶液中消毒30秒钟,无菌水冲洗7次后用无菌滤纸吸干水分后,置于0.5%的次氯酸钠溶液中消毒30分钟,无菌水冲洗10次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.5-3厘米左右的带节茎段并接种到诱导培养基中,置于25℃自然光光照培养40天即可诱导形成不定芽,诱导率达92%。所述的诱导培养基为:WPM培养基 4毫克/升ZT 4毫克/升CTK 30克/升蔗糖 4.5克/升琼脂,pH为5.4。
不定芽增殖培养:将诱导得到的不定芽切成长约1.5-2.0厘米的茎段并接种到不定芽增殖培养基中培养40天即可实现不定芽的增殖,增殖系数达到5.5。所述的不定芽增殖培养基为:WPM培养基 4毫克/升IAA 40毫克/升腺嘌呤 30克/升蔗糖 4.5克/升琼脂pH为5.4。
生根培养:从基部切取增殖得到的长约2.0-3.0厘米的不定芽并接种到生根培养基中培养40天即能实现试管苗的生根,生根率达到95.8%。所述的生根培养基为:MS培养基 2毫克/升ETH 30克/升蔗糖 4克/升琼脂,pH为5.4。