旱柳SRAP-PCR体系建立与优化

以假俭草叶片dna为模板,采用正交试验设计,以mg2+、dntp、引物和taqdna聚合酶4种因素3个水平,对假俭草srap反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板dna对扩增效果的影响,建立了假俭草的srap最佳反应体系。结果表明,假俭草srap-pcr最佳反应体系为:2μl10×pcrbuffer、60ng模板dna、mg2+1.50mmol/l、dntp260μmol/l、引物0.25μmol/l、taqdna聚合酶0.5u,总体积为20μl。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以mg2+浓度影响最大,taqdna聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个srap引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用srap标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据。

分别采用单因子试验和正交设计试验对影响红花檵木rsap-pcr反应体系的5个因素(dna模板量、mg2+浓度、dntps浓度、引物浓度、taq酶量)在4个水平上进行优化.结果表明,2种方法得到的影响因素的最优水平存在差异,通过综合比较与分析,选取红花檵木rsap-pcr最优反应体系为:在25μl的反应体系中,模板量70ng,mg2+浓度1.50mmol/l,dntps浓度0.25mmol/l,引物浓度0.20mmol/l,taq酶量2.50u.

以假俭草为材料,对影响issr-pcr扩增结果的因素进行了探讨,建立了适合假俭草issr-pcr分析的最佳反应体系。表明在20μl总体积中,包含40ng模板dna、issr引物0.4μmol/l、dntps0.1mmol/l、mg2+1.0mmol/l0、.1utaqdna聚合酶和10×buffer2.0μl。扩增条件为:94℃预变性5min;94℃变性45s,55℃退火45s,72℃延伸1.5min,35个循环;72℃延伸7min。

为建立鹅掌楸简单序列重复区间扩增issr的pcr优化反应体系,以鹅掌楸叶片基因组dna为材料,系统地测试了模板dna、引物、dntps、mg2+浓度、taqdna聚合酶用量及退火温度对issr-pcr反应体系的影响。结果表明:优化的pcr反应体系为:20μl总体系中,含30ng模板dna,0.3μmol.l-1随机引物,0.2mmol.l-1dntps,1.4mmol.l-1mg2+,0.8utaqdna聚合酶;最佳退火温度为60℃;pcr反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,60℃退火45s,72℃延伸2min;45个循环;72℃再延伸7min。

以西洋杜鹃(rhododendronhybridum)叶片提取的基因组dna为材料,用引物ubc880(序列为ggagaggagaggaga)研究了pcr反应体系的主要成分及退火温度对该种植物issr扩增结果的影响。确立了可用于西洋杜鹃issr-pcr分析的最适宜的pcr反应体系:20μlpcr反应体积中,含10ng模板dna,0.25mmol.l-1dntps,2.0mmol.l-1mg2+,1.0utaqdna聚合酶,0.4μmol.l-1引物,并确定引物ubc880的最适退火温度为54.4℃。pcr扩增程序:94℃预变性5min,94℃变性45s,54.4℃退火45s,72℃延伸1.5min,共40个循环后,72℃延伸7min,4℃保存。应用该issr体系对11份西洋杜鹃种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。

采用单因子试验和正交设计方法,对影响阔叶十大功劳issr-pcr反应体系的引物、taqdna聚合酶、dntps、模板dna及退火温度5个因素进行优化,为探讨阔叶十大功劳种质遗传多样性奠定基础.结果表明:阔叶十大功劳issr-pcr的最佳反应体系为:在20μl反应体系中,0.5μmol/l引物、0.5utaq酶、150μmol/ldntps和20ng模板dna.在最佳反应条件下,从80条引物中筛选出15条扩增稳定、多态性丰富的issr引物,并经过9份阔叶十大功劳种质检验,证明该体系具有扩增条带清晰、稳定、重复性好等优点.综上所述,本文所建立的issr-pcr反应体系可用于阔叶十大功劳的种质鉴定及遗传多样性分析.

issr标记能揭示出种间、种内遗传变异情况,更好地揭示亲缘关系和遗传多样性。以大花萱草的5个品种为试材,研究了影响大花萱草issr-pcr扩增效果的各项因素,建立了适合大花萱草issr-pcr的最佳反应体系:20μl反应体系中,10×buffer2μl,dntp0.2mmol/l,mg2+浓度1.5mmol/l,引物浓度0.5mmol/l,taq酶10.002nkat,dna模板20ng。大花萱草的最佳issr扩增反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性40s,50℃退火45s,72℃延伸1.5min,共40个循环;最后72℃延伸10min。通过该反应程序进行的大花萱草issr扩增可获得清晰、稳定的条带。

采用单因子试验与正交试验的方法,研究了海南龙血树(dracaenacambodianapierreexgagnep)issr-pcr反应体系中的主要影响因子,筛选出16条有效引物并优化了它们的退火温度,此外还检测了体系的重复性。优化后的25μl反应体系包含:10×pcrbuffer2.5μl,3.0mmol/lmgcl2,300μmol/ldntps,taq聚合酶3.0u,引物0.2μmol/l,dna模板20ng。该反应体系可用于海南龙血树的遗传多样性和遗传结构的分析。

一、砧木的选择。(一)嫁接亲和力:从树木学的角度分析,旱柳和垂柳同属杨柳科柳属。生产实践证明,与垂柳亲和力的排名依次为旱柳、金丝柳、黄柳。(二)生物学特性:旱柳还具有根系发达、干性良好、寿命长、抗病虫害

对影响三角梅issr-pcr扩增反应的各个参数进行优化,建立适合三角梅的issr反应体系:pcr反应体积为20μl,其中10×buffer(含mg2+)2.0μl,dntp250μmol/l,taq酶1.0u,引物0.3μmol/l,模板dna20ng。扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,51.6℃退火1min,72℃延伸2min,34个循环;最后72℃延伸7min。该反应体系标记点位清晰、稳定、重复性好,适宜三角梅issr分析,为应用issr技术鉴定三角梅种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础。

对影响三角梅issr-pcr扩增反应的各个参数进行优化,建立适合三角梅的issr反应体系:pcr反应体积为20μl,其中10×buffer(含mg2+)2.0μl,dntp250μmol/l,taq酶1.0u,引物0.3μmol/l,模板dna20ng。扩增程序:94℃预变性5min;94℃变性1min,51.6℃退火1min,72℃延伸2min,34个循环;最后72℃延伸7min。该反应体系标记点位清晰、稳定、重复性好,适宜三角梅issr分析,为应用issr技术鉴定三角梅种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础。

以蜡状芽孢杆菌(bacilluscereus)为试验材料,比较细菌基因组dna的提取方法。将eric-pcr应用于醋液分离菌的研究,对此反应体系的主要因素进行优化,最终建立了适合于此菌种的eric-pcr体系。采用改良的传统细菌基因组dna提取方法,所提取的dna质量较高,能够满足eric-pcr反应的需要。反应体系:25μl反应体积10×扩增缓冲液(含mg2+)2.5μl,20pmol/μleric-pcr引物e11μl,20pmol/μleric-pcr引物e21μl,dna模板2μl,2.5mmol/ldntps混合液2.0μl,taq聚合酶1.1μl,双蒸水补齐;pcr反应程序为:94℃变性3min,1个循环;94℃变性30s,55℃退火40s,72℃延伸1min,30个循环;72℃延伸4min。

建立完整bim软件体系概念 摘要：bim技术应用于国内建设项目至今天已经进入一个快车道，但 是大量的从业者对于bim技术的印象还是停留在一款软件应用上，认 为bim技术不过就是一个碰撞检测软件。这是一个很大的误解，bim 技术实质上是一个软件体系，可以把bim应用软件划分为从建模软件 到运维软件的九大类别，这九类软件分别对应着bim不同的应用阶 段，每类软件都有几种到几种到几十种不同国家、不同公司开发的应 用软件，它们互相竞争又互相补充。 关键词：bim技术；精细化模型；软件体系 establishacompleteconceptofbimsoftwaresystems abstract：nowadays,theapplicationofbimtechnologyindomestic constructionprojectshasb

多年的旱柳小老树因干旱、病虫害等原因影响,出现枯梢和死亡.经过截头改造复壮处理来恢复生机和提高林分质量和利用价值.

运用单因素试验法对影响也门铁issr-pcr扩增的各个因素进行了优化,优化体系为:25μl反应体系中,taq酶浓度0.04u.μl-1、dntps浓度0.18mmol.l-1、引物浓度0.4μmol.l-1、mg2+浓度2.0mmol.l-1、模板浓度0.8ng.μl-1、甲酰胺浓度1.6%、1×buffer,最后用ddh2o补足到25μl。利用优化体系和筛选的引物对也门铁及其嵌合体品种进行了issr扩增分析。

利用正交设计试验,对影响issr-pcr的mg2+、dntps、引物、taqdna聚合酶和模板dna5个因素进行优化试验。结果表明:25μlissr-pcr反应体系中各因素的最佳条件为mg2+2.5mmol/l、dntps0.25mmol/l、引物0.2μmol/l、taqdna聚合酶1.0u,模板dna40ng。通过对狗牙根issr-pcr最佳反应体系进行梯度退火试验,得到引物ubc881的最佳退火温度为50.5℃。该体系在24个狗牙根种质中获得较好的扩增结果,该优化体系为今后利用issr技术进行狗牙根属种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。

采用单因子试验和正交试验设计,对影响海南龙血树rapd-pcr反应的模板dna量、mg2+、dntp和引物浓度,taq聚合酶用量等因子进行研究,分析各因子对rapd-pcr扩增结果的影响,确立了海南龙血树rapd-pcr反应的最佳条件,即在25μl反应体系中,包含10×buffer2.5μl,2.0mmol/lmgcl2,300μmol/ldntps,taq酶1.5u,引物0.8μmol/l和dna模板20ng。以此条件为基础,筛选出适用于海南龙血树rapd-pcr分析的18条有效引物,为采用rapd技术分析海南龙血树种群遗传变异水平和遗传结构打下了基础。

为了建立并优化大青叶srap-pcr扩增体系。以大青叶基因组dna为模板,通过正交试验设计,从mg2+、dntp、引物、taqdna聚合酶和模板dna5种因素5个水平对大青叶srap-pcr反应体系进行优化。建立的大青叶srap-pcr最佳反应体系为25μl反应体系中含1.5mmol·l-1mg2+、0.15mmol·l-1dntps、0.60μmol·l-1引物、2.0utaqdna聚合酶和26ngdna模板。在这一体系下对不同大青叶材料的pcr扩增和在不同引物组合下扩增都证明该体系稳定可靠适合于大青叶srap分子标记。这一体系的建立为今后利用srappcr分子标记技术开展大青叶分子遗传学研究奠定了基础。

[目的]建立贯叶连翘的issr-pcr反应体系,并对其条件进行优化。[方法]以贯叶连翘基因组dna为模板,用l16(45)正交试验设计系统分析引物浓度、taqdna聚合酶浓度、mg2+浓度、dntp浓度和模板dna浓度5种因素对贯叶连翘issr-pcr反应扩增结果的影响。[结果]正交试验设计的方法可以用于贯叶连翘issr-pcr反应体系的建立,经过优化得到贯叶连翘issr-pcr反应体系的最佳条件为:20μlissr-pcr反应体系中含10×pcrbuffer,mg2+浓度1.2mmol/l,taqdna聚合酶浓度50u/ml,dna浓度20ng/μl,dntp浓度250μmol/l,引物浓度0.75μmol/l。[结论]试验建立的贯叶连翘的issr-pcr反应体系重复性好、分辨率高,结果稳定可靠。

火焰南天竹(nandinadomestica‘firepower’.)属于小檗科(berberidaceae)南天竹属(nandina)的常绿小灌木,在园林应用中具有十分重要的观赏价值。常规育苗方法扦插繁殖,繁殖率低,火焰南天竹组培中繁殖率及生根仍是一大难题。研究了不同激素对火焰南天竹不定芽诱导、增殖、生根的影响。结果表明:最佳诱导培养基为ms+0.3mg/l6-ba+30g/l蔗糖,诱导率为93%；增殖培养基为ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa+30g/l蔗糖,增殖系数为3.5；生根培养基为1/2ms+0.3mg/liba+20g/l蔗糖,诱导率达97%。火焰南天竹种苗经有效成分含量为50%的多菌灵稀释1000倍,浸泡1h后移栽,移栽成活率高,长势良好。所建立的火焰南天竹快繁体系增殖速度快,短期内可获得大量植株,为工厂化生产提供技术支持,满足市场需求。

应用应力波对东北林业大学校园内的40株旱柳进行检测,获取样本树120个横断面的二维应力波图像及波速矩阵。依据图像,把立木横断面腐朽状况分为无腐朽、心腐、边腐、心腐边腐共存断面等4类。进一步分析表明:应力波在健康立木横断面内径向传播速度最快,并且波从某一传感器到其余传感器(按顺时针计)的速度变化是先增后减的趋势;立木腐朽会导致应力波传播速度降低,应力波在心腐立木横断面内传播趋势不是先增后减,而变成非常平坦的曲线。因此,可以利用应力波波速的变化来对立木内部腐朽进行估计。另外,根据应力波检测成像结果可以识别腐朽面积及位置,并能够依据断面t/r值对旱柳行道树的安全性进行初步评价。

【目的】优化大旗瓣凤仙issr-pcr反应体系,为大旗瓣凤仙遗传多样性分析提供技术参考。【方法】利用正交试验设计对大旗瓣凤仙issr-pcr反应体系的5个因素(mg2+、dntp、引物、taqdna聚合酶、模板dna)4水平进行优化分析,并在此基础上对pcr反应过程中的退火温度进行筛选。【结果】建立了大旗瓣凤仙issr-pcr的优化反应体系,即在25.0μl反应体系中含1×pcrbuffer、mg2+1.5mmol/l、dntp0.25mmol/l、引物0.8μmol/l、taqdna聚合酶0.75~1.00u、模板dna100ng。通过该体系可以筛选出6条对大旗瓣凤仙种群扩增效果较好的引物。【结论】优化的issr-pcr反应体系具有较高的稳定性,可用于大旗瓣凤仙及凤仙属植物种群的issr遗传多样性分析。