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第一章 引言
第二章 基本原理
第三章 具体操作
第四章 聚丙烯酰胺凝胶电泳在研究病毒蛋白质和核酸方面的应用
本书介绍了聚丙烯酰胺凝胶电泳技术在分离、分析和制备蛋白质、核糖核酸等生物大分子方面的基本原理和具体操作。应用部分着重介绍了蛋白质、核糖核酸的分子量测定及该技术近年来在病毒学研究工作中的一些应用。
本书可供临床化学、食品化学、药理学、生物化学、免疫学等有关科技人员和大专院校师生参考。
聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉...
(2)安装电泳槽和镶有长、短玻璃板的硅橡胶框时,位置要端正,均匀用力旋紧固定螺丝,以免缓冲液渗漏。样品槽板梳齿应平整光滑。
种类按离子特性分为:非离子型、阳离子型、阴离子型、两性离子型。基本信息1.聚丙烯酰胺为白色粉状或颗粒型。2.不溶于大多数有机溶液。3.具有良好的絮凝性4.聚丙烯酰胺本身及其水解体没有毒性,只有当给入量...
实验聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳 原理 一 聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis, 简称 PAGE),由称盘状电泳。 这种电泳是在区带电泳的基础上, 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物, 采用电泳 基质的不连续体系(即凝胶层的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、 pH 的不连续性及 电位梯度的不连续性) ,使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带(厚度为 10-2cm),然后再进行电泳分离。 圆盘电泳名称来源即由于此法的原理是依靠基质的不连续性( discontinuity ),凑巧在垂 直柱形凝胶上分散出的区带也很象圆盘状( discoid shape),取“不连续性”和“圆盘状”的 英文字头“ disc”。因此英文名称为“ disc electrophoresis”,中文直译为盘状电泳。 仪器装置:如 图 A 所示,上下两个
一种耐温型聚丙烯酰胺凝胶堵水剂的室内研究
一种以聚丙烯酰胺、苯酚、甲醛为主要原料制备的耐温型凝胶堵水剂。考察各组分以不同比例配制时,对凝胶堵水剂各种性能的影响,确定凝胶堵水剂各组分的最佳基本配比。室内研究结果表明,该堵水剂耐温性好,黏度较高,成胶时间可调,适应温度宽,封堵能力强,并且组分简单,原料易得,可用于油田的调剖堵水作业。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是什么,它具有哪些特点,经过我们研究了解,对聚丙烯酰胺凝胶电泳有了进一步的认识。凝胶电泳顾名思义就是由丙烯酰胺在引发剂与加速剂形成的交联的凝聚胶多孔聚合物,就是以聚丙烯酰胺凝胶作为介质的电泳方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳具有很多优势特点,因为它是聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子,具有比较好的机械性质;凝胶在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明,易观察,可用检测仪直接测定;丙烯酰胺是比较纯的化合物,可以精制,减少污染等。
人们经常把聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺给误认错误,其实两者之间是有很大区别的,所以通过我们对凝胶电泳的简要介绍,多多少少对聚丙烯酰胺凝胶电泳得到认识,以便用户区分凝胶电泳与聚丙烯酰胺PAM。
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)或称为活性电泳是在不加入SDS 和疏基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于酶的鉴定、同 工酶分析和提纯。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷,它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用,因而可以得到较高的分辨率,尤其是在电泳分离后仍能保持蛋白质和酶等生物大分子的生物活性,对于生物大分子的鉴定有重要意义,其方法是在凝胶上进行两份相同样品的电泳,电泳后将凝胶切成两半,一半用于活性染色,对某个特定的生物大分子进行鉴定,另一半用于所有样品的染色,以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。
非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性SDS-PAGE电泳在操作上基本上是相同的,只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候,要利用低pH凝胶系统,分离酸性蛋白时候,要利用高pH凝胶系统。 酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统,蛋白会带负电荷,蛋白会向阳极移动;而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行,蛋白带正电荷,这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳分离碱性蛋白。
聚丙烯酰胺凝胶电泳;polyacrylamide gel electrophoresis;PAGE
用聚丙烯酰胺为支持基质的电泳程序。一般说来,实现聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种类型。⑴单向电泳:采用完整的蛋白质或用十二烷基磺酸钠(SDS)处理的蛋白质的单向泳动,在有凝胶的平板上平行分离(过去也有用在玻管中的圆筒形棒状凝胶进行电泳的,现已很少有人使用)。⑵双向电泳:首先用天然蛋白质进行分离,然后凝胶平板再用SDS处理,样品便在第二向得到分离。第一次分离了各种各样的蛋白质,因此第二向分离的是蛋白质亚基。主要优点是:⑴合成聚合物,故重复性良好;⑵分离能力好;⑶通过增减丙烯酰胺单体和交联剂(N,N′-亚甲基双丙烯酰胺)的浓度,可以调节凝胶的孔径大小;⑷操作简便、时间短;⑸化学性质稳定、机械性能好,柔软;⑹在酸性或碱性缓冲液中均可进行电泳,而且可加入两性电解质进行等电点电泳,可用含电解质表面活性剂(SDS)或非电解质表面活性剂(Np40、Tritonx-100等)的凝胶进行电泳,亦可使两者组合进行双向电泳等等,使用范围广泛,利用价值日益提高;⑺由于染色技术的进步,可以进行定量,也可检测出极微量的斑点(琼脂糖电泳)。