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凝胶过滤层析凝胶层析的应用

凝胶过滤层析凝胶层析的应用

⑴脱盐:高分子(如蛋白质、核酸、多糖等)溶液中的低分子量杂质,可以用凝胶层析法除去,这一操作称为脱盐。本法脱盐操作简便、快速、蛋白质和酶类等在脱盐过程中不易变性。适用的凝胶为SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6.柱长与直径之比为5-15,样品体积可达柱床体积的25%-30%,为了防止蛋白质脱盐后溶解度降低会形成沉淀吸附于柱上,一般用醋酸铵等挥发性盐类缓冲液使层析柱平衡,然后加入样品,再用同样缓冲液洗脱,收集的洗脱液用冷冻干燥法除去挥发性盐类。

⑵用于分离提纯:凝胶层析法已广泛用于酶、蛋白质、氨基酸、多糖、激素、生物碱等物质的分离提纯。凝胶对热原有较强的吸附力,可用来去除无离子水中的致热原制备注射用水。

⑶测定高分子物质的分子量:用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内,在同一条件下层析,记录每一分钟成分的洗脱体积,并以洗脱体积对分子量的对数作图,在一定分子量范围内可得一直线,即分子量的标准曲线。测定未知物质的分子量时,可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗脱后,根据物质的洗脱体积,在标准曲线上查出它的的分子量。

⑷高分子溶液的浓缩:通常将SephadexG-25或50干胶投入到稀的高分子溶液中,这时水分和低分子量的物质就会进入凝胶粒子内部的孔隙中,而高分子物质则排阻在凝胶颗粒之外,再经离心或过滤,将溶胀的凝胶分离出去,就得到了浓缩的高分子溶液

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凝胶过滤层析造价信息

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盘(过滤器)

  • 盘 平面过滤介质抗拉强度800N/cm过滤面积6m2
  • 江苏创惠
  • 13%
  • 广西立淇环保有限公司
  • 2022-12-06
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盘(过滤器)

  • 盘直径 2m,平面过滤介质抗拉强度1000N/cm单个过滤面积6.5m2
  • 广东新环
  • 13%
  • 广西立淇环保有限公司
  • 2022-12-06
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盘(过滤器)

  • 盘直径2m,平面过滤介质抗拉强度600N/cm
  • 蒲华
  • 13%
  • 广西立淇环保有限公司
  • 2022-12-06
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Y型过滤

  • DN150
  • 方兴
  • 13%
  • 安徽方兴实业股份有限公司
  • 2022-12-06
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Y型过滤

  • DN200
  • 方兴
  • 13%
  • 安徽方兴实业股份有限公司
  • 2022-12-06
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过滤

  • W41B-16T DN50
  • 汕头市2015年7月信息价
  • 建筑工程
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过滤

  • W41B-16T DN100
  • 汕头市2015年7月信息价
  • 建筑工程
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过滤

  • W41B-16T DN150
  • 汕头市2015年7月信息价
  • 建筑工程
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过滤

  • W41B-16T DN150
  • 汕头市2015年1月信息价
  • 建筑工程
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过滤

  • W41B-16T DN150
  • 汕头市2013年7月信息价
  • 建筑工程
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凝胶成像分析系统

  • LG 2020
  • 6229套
  • 1
  • 普通
  • 含税费 | 含运费
  • 2015-05-20
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凝胶成像分析系统

  • 1、机箱 1.1箱体两侧独特专利切窗口设计,配有防紫外玻
  • 1套
  • 1
  • 中档
  • 含税费 | 含运费
  • 2018-12-13
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清洗凝胶

  • 每箱4瓶
  • 1箱
  • 1
  • 特洁安
  • 中档
  • 不含税费 | 含运费
  • 2021-09-01
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凝胶成像分析系统

  • LG 2000
  • 95套
  • 1
  • 普通
  • 不含税费 | 不含运费
  • 2015-10-06
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凝胶成像分析系统

  • LG 2020D
  • 3586套
  • 1
  • 普通
  • 不含税费 | 不含运费
  • 2015-07-24
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凝胶过滤层析回收方法

如果不再使用可将其回收,一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干,依次用70%、90%、95%乙醇脱水平衡至乙醇浓度达90%以上,滤干,再用乙醚洗去乙醇、滤干、干燥保存。湿态保存方法是凝胶浆中加入抑菌剂或水冲洗到中性,密封后高压灭菌保存。

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凝胶过滤层析使用方法

⒈凝胶的选择根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分子物质和小分子物质分开,由于它们在分配系数上有显著差异,这种分离又称组别分离,一般可选用SephadexG-25和G-50,对于小肽和低分子量的物质(1000-5000)的脱盐可使用SephadexG-10,G-15及Bio-Gel-p-2或4.如果实验目的是将样品中一些分子量比较近似的物质进行分离,这种分离又叫分级分离。一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶,层析过程中这些物质都能不同程度地深入到凝胶内部,由于Kd不同,最后得到分离。

⒉柱的直径与长度根据经验,组别分离时,大多采用2-30cm长的层析柱,分级分离时,一般需要100cm左右长的层析柱,其直径在1-5cm范围内,小于1cm产生管壁效应,大于5cm则稀释现象严重。长度L与直径D的比值L/D一般宜在7-10之间,但对移动慢的物质宜在30-40之间。

⒊凝胶柱的制备凝胶型号选定后,将干胶颗粒悬浮于5-10倍量的蒸馏水或洗脱液中充分溶胀,溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去。自然溶胀费时较长,加热可使溶胀加速,即在沸水浴中将湿凝胶浆逐渐升温至近沸,1-2小时即可达到凝胶的充分胀溶。加热法既可节省时间又可消毒。

凝胶的装填:将层析柱与地面垂直固定在架子上,下端流出口用夹子夹紧,柱顶可安装一个带有搅拌装置的较大容器,柱内充满洗脱液,将凝胶调成较稀薄的浆头液盛于柱顶的容器中,然后在微微地搅拌下使凝胶下沉于柱内,这样凝胶粒水平上升,直到所需高度为止,拆除柱顶装置,用相应的滤纸片轻轻盖在凝胶床表面。稍放置一段时间,再开始流动平衡,流速应低于层析时所需的流速。在平衡过程中逐渐增加到层析的流速,千万不能超过最终流速。平衡凝胶床过夜,使用前要检查层析床是否均匀,有无"纹路"或气泡,或加一些有色物质来观察色带的移动,如带狭窄、均匀平整说明层析柱的性能良好,色带出现歪曲、散乱、变宽时必须重新装柱。

⒋加样和洗脱凝胶床经过平衡后,在床顶部留下数亳升洗脱液使凝胶床饱和,再用滴管加入样品。一般样品体积不大于凝胶总床体积的5%-10%。样品浓度与分配系数无关,故样品浓度可以提高,但分子量较大的物质,溶液的粘度将随浓度增加而增大,使分子运动受限,故样品与洗脱液的相对粘度不得超过1.5-2.样品加入后打开流出口,使样品渗入凝胶床内,当样品液面恰与凝胶床表面相平时,再加入数毫升洗脱液中洗管壁,使其全部进入凝胶床后,将层析床与洗脱液贮瓶及收集器相连,预先设计好流速,然后分部收集洗脱液,并对每一馏份做定性、定量测定。

⒌凝胶柱的重复使用、凝胶回收与保存一次装柱后可以反复使用,不必特殊处理,并不影响分离效果。为了防止凝胶染菌,可在一次层析后加入0.02%的叠氮钠,在下次层析前应将抑菌剂除去,以免干扰洗脱液的测定。

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凝胶过滤层析凝胶层析的应用常见问题

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凝胶过滤层析优点

它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。

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凝胶过滤层析基本原理

凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,小分子物质能进入其内部,流下时路程较长,而大分子物质却被排除在外部,下来的路程短,当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。

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凝胶过滤层析凝胶层析的应用文献

硅胶G薄层层析 硅胶G薄层层析

硅胶G薄层层析

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页数: 5页

实验一 硅胶 G 薄层层析 薄层层析是在吸附色谱基础上发展起来的一种快速微量操作简便的层析法。 硅胶是薄层 层析中应用最广的吸附剂,由于硅胶薄层的机械性能差,一般必须加入 10%~ 15%的煅石 膏作为粘合剂, 称为硅胶 G。展层剂凭借毛细管效应在薄层中移动, 点在薄层上的样品随展 层剂的移动而不同程度的移动。 因为被分离物质的极性有差异, 因而与吸附剂和展开剂的亲 和力有差别,结果在薄层板上的迁移率 Rf 值不同,对于某一物质,在一定的溶剂系统和一 定的温度下, Rf 值是该物质的特征常数,被分离物质 Rf 值差别越大,分离效果越好。可选 择适当的展开剂扩大被分离物质的 Rf 值差别,以期达到较理想的分离效果。 第一部分 可溶性糖的薄层分离与鉴定 一、原理 糖是多羟基化合物,在硅胶 G 薄层上展层时,被吸附的强弱有差别,其吸附力主要与 糖分子中所含有羟基数目有关。吸附力大小顺序为:三糖

水热-凝胶法ZrO_2气凝胶的制备与表征 水热-凝胶法ZrO_2气凝胶的制备与表征

水热-凝胶法ZrO_2气凝胶的制备与表征

格式:pdf

大小:25KB

页数: 3页

以硝酸氧锆为锆源,尿素为凝胶促进剂,通过水热凝胶法结合超临界乙醇干燥,可成功制备出具有良好纳米三维网络结构的ZrO2气凝胶。采用透射电镜(TEM)、比表面积及孔隙度分析仪(BET),X射线衍射仪等测试手段对其结构进行了表征与测试。结果表明,ZrO2气凝胶主要由无定型和四方晶相组成,其比表面积为445 m2/g,孔径主要分布在5~7 nm和30~40 nm两处。

(尺寸排阻层析)

SEC指的是尺寸排阻层析。

中文名
尺寸排阻层析
外文名
SEC
全称
Size-Exclusion Chromatography

, SEC,又称凝胶过滤层析(Gel Filtration Chromatography,GFC)

凝胶渗透层析(Gel Permeation Chromatography,GPC)

分子筛层析(Molecular Sieve Chromatography,MSC)

在高效液相色谱分析中,用GFC或SEC表示凝胶过滤色谱或尺寸排阻色谱,流动相通常是水溶液;在有机高分子分析中,常用GPC表示凝胶渗透色谱,流动相通常是有机溶剂;在蛋白质分离纯化中用GFC或SEC表示凝胶过滤层析或尺寸排阻层析;本文以下内容均针对蛋白质分离,因此均以凝胶过滤层析(GFC)表示。

分离机理

填料是由高分子交联而成、内部具有网状筛孔的固体颗粒,利用球状凝胶内的筛孔的大小,不同水力学半径的分子在通过填料时运行路径存在差异,利用该差异将不同大小的蛋白质进行分离。

蛋白质分子流过填充凝胶的管柱时,大分子无法进入凝胶筛孔,而只流经凝胶及管柱间的孔隙,因此总体运行路径较短,从层析柱入口到出口所需时间较短;较小的分子因为进入凝胶内的筛孔,总体运行路径较长,故在管柱内的停留时间较长;基于此原理可以区分大小不同的分子,亦可与已知大小的分子作比较而确定未知样品的分子量。

球形蛋白与线性分子在凝胶过滤层析中的保留行为存在差异,因此使用球形蛋白制作的分子量标准曲线不能用于明胶多肽、淀粉或其它聚合物。2100433B

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凝胶过滤概述

凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,小分子物质能进入其内部,流下来速度慢,而大分子物质却被排除在外部,下来的速度快,当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。

它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。

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PLC-2 全波长紫外检测仪应用范围

生物化学、合成化学、天然产物、药物开发、食品化学、农业化学、化妆品、聚合物与石化等行业的科研与制备。可进行离子交换层析、亲和层析 凝胶过滤层析、疏水作用层析等方法,用于蛋白质、酶、核酸、核苷酸、多肽、(含/不含芳香族氨基酸)及其它任何有紫外吸收的生物/非生物样品的分离分析、流动检测,是生物分子纯化的理想选择,它具有功能多,使用简便。

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