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抑制消减杂交技术主要缺陷

抑制消减杂交技术主要缺陷

① SSH技术需要较多的起始材料且更多地依赖于PCR技术,若是mRNA量不够,低丰度的差异表达基因cDNA可能检测不到

② 消减库中的cDNA经过Rsal等限制酶消化后,不再是全长cDNA

③ 不能同时对多个材料之间进行比较,材料之间存在过多的差异及小片段缺失也不能有效被检测

④完全无酶切位点的片段或酶切位点较少的基因组无法用SSH技术筛选

⑤ 利用抑制消减杂交所获得的片段,须经过Nothern杂交或反Nothern杂交来进一步鉴定,去除假阳性。

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抑制消减杂交技术造价信息

  • 市场价
  • 信息价
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杂交石竹

  • 髙度 cm15-25冠幅 cm10-15密度 株/m2 36花期5-10 月开花髙度 cm25-30花卉种类、 颜色及性状进口 F1代,3朵花 以上,出苗,红、粉、 玟红、紫分色
  • 13%
  • 甘肃新时代园林工程有限公司
  • 2022-12-07
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旋转式滗水器主要技术

  • 品种:滗水器;系列:BSX系列;型号:BSX-900;堰口宽度:9000;泵功率(kW):4;
  • 庆华
  • 13%
  • 哈尔滨庆华市政工程有限公司
  • 2022-12-07
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旋转式滗水器主要技术

  • 品种:滗水器;系列:BSX系列;型号:BSX-100;堰口宽度:1000;泵功率(kW):0.75;
  • 庆华
  • 13%
  • 哈尔滨庆华市政工程有限公司
  • 2022-12-07
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旋转式滗水器主要技术

  • 品种:滗水器;系列:BSX系列;型号:BSX-600;堰口宽度:6000;泵功率(kW):2.2;
  • 庆华
  • 13%
  • 哈尔滨庆华市政工程有限公司
  • 2022-12-07
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旋转式滗水器主要技术

  • 品种:滗水器;系列:BSX系列;型号:BSX-50;堰口宽度:500;泵功率(kW):0.75;
  • 庆华
  • 13%
  • 哈尔滨庆华市政工程有限公司
  • 2022-12-07
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龙骨

  • 12×38 UC38
  • m
  • 汕头市2013年4季度信息价
  • 建筑工程
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龙骨

  • 12×38 UC38
  • m
  • 汕头市2013年3季度信息价
  • 建筑工程
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龙骨

  • 60×27×1.2 C60系列(天花)
  • 湛江市2009年1季度信息价
  • 建筑工程
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龙骨

  • 50×12×1.2 C60系列(天花)
  • 湛江市2009年1季度信息价
  • 建筑工程
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龙骨

  • 60×27×0.6 C60系列(天花)
  • 湛江市2008年1季度信息价
  • 建筑工程
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客房主要木皮

  • WD 2001 定制颜色型号:榆木816 表面做法:哑光半封闭漆+硬化漆
  • 45.1347m²
  • 3
  • 不含税费 | 不含运费
  • 2015-07-02
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主要空间入口名称

  • 2800×300×23
  • 50个
  • 3
  • 高档
  • 含税费 | 含运费
  • 2022-03-08
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主要出入口

  • 30cm×10cm
  • 5个
  • 1
  • 高档
  • 含税费 | 含运费
  • 2017-08-30
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主要诊疗科牌

  • /
  • 1套
  • 3
  • 中档
  • 含税费 | 含运费
  • 2019-10-31
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主要出入口

  • 尺寸:400×150mm;材质:荧光式铝合金,底色:R:19 G:140 B:195;字体:经典特黑简
  • 1个
  • 3
  • 不含税费 | 不含运费
  • 2016-08-25
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抑制消减杂交技术方法优势

① 该方法的最大优点是降低了假阳性率

② SSH方法具有高度敏感性

③ 降低了起始样品的使用量

④ 在一次SSH反应中,可以同时分离出成百个差异表达基因[23],极大地提高了检测效率

⑤提高了基因克隆的效率,由于使用4碱基内切酶使得基因(组)的复杂程度降低。

⑥ 该技术还具有背景低、重复性强等优点

⑦ 程序相对简单,操作简便易行

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抑制消减杂交技术技术原理

SSH 即抑制消减杂交技术是由Diatchenko 等于1996 年以m RNA 差别显示技术为基础建立起来的筛选未知差异表达基因的新技术。它主要基于最近出现的抑制PCR , 并结合标准化(normalization 或equalization ) 和消减杂交( substractive hybridization)。抑制PCR 通过利用含引物序列的双链接头(adaptor) 充当引物模板, 使两端接上同一接头的非目的双链片段具有反向末端重复序列, PCR 中不能扩增, 从而达到抑制非目的片段而选择性扩增目的片段的目的。标准化步骤平衡了目的基因群中cDNA 的丰度, 即低丰度差异表达的基因不会丢失, 而高丰度差异表达的基因又不会被过量分离。消减杂交则扣除了目的基因群( tester) 与驱赶基因群(driver) 间的同源序列。

存在于tester 中而不存在于driver 中, 或在tester 中较在driver 中有高水平表达。

①第一次差减杂交,用过量的drivercDNA分别与tester2adaptor1cDNA和tester2adaptor2cD2NA杂交。分别形成SSH技术原理图所示的tester单链片段a、tester双链片段b、tester2driver同源双链片段c和driver单、双链片段d。根据杂交二级动力学,丰度较高的分子产生同源杂交体(homo2hy2brid)的速度较快,使高丰度与低丰度单链片段a浓度大致相等,从而实现tester单链片段a的标准化[6],并使连接一种接头的差异表达基因a初步富集。②第二次差减杂交,将上述分别与drivercDNA杂交后的tester2adaptor1和tester2adaptor2cDNA混合,再加入新制备的变性drivercDNA,因tester2adaptor1和tester2adaptor2cDNA同源,除形成a、b、c、d片段外,又形成了新的连接有两种接头的双链杂交片段e,即连接两种接头的差异表达序列e,是进行PCR指数扩增的模板。

PCR之前填补分子粘性末端以利于退火。第一轮PCR,加入针对adaptor1和adaptor2外侧序列的特异引物进行扩增。结果:a、d片段因没有引物结合位点,不能进行PCR扩增;b片段由于两端均为同一接头,具有反向末端重复序列(invertedre2peats),在单链内部形成互补发卡结构的可能性及稳定性均大于引物与其配对结合的可能性及稳定性,故在PCR反应中不能扩增;c片段的一端为一种接头而另一端无接头,只能线形扩增;只有e片段末端有两种不同接头,可通过PCR作指数扩增。第二次PCR,加入一对与接头内侧序列相同的巢式PCR特异引物,进一步富集差异表达序列并降低背景。经过两轮PCR,基于PCR抑制效应的存在,以及选用了两对引物,可以特异扩增代表了差异表达的cDNA片段。

经上述PCR所得的差别表达基因片段可以利用接头上存在的酶切位点,插入适当载体,转化细菌。经X-Gal蓝白菌落初步筛选,获得具有差异表达cDNA片段的阳性克隆。然后通过Northern杂交鉴定,cDNA序列分析,可获得一些新的ESTs序列,如进一步对该ESTs进行深入的结构和功能研究,可望获得新的具有重要生物学作用的全长功能基因。

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抑制消减杂交技术主要缺陷常见问题

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抑制消减杂交技术主要缺陷文献

野鸢尾和射干种间杂交F_2代主要性状变异分析 野鸢尾和射干种间杂交F_2代主要性状变异分析

野鸢尾和射干种间杂交F_2代主要性状变异分析

格式:pdf

大小:495KB

页数: 7页

通过观测野鸢尾(Iris dichotoma)×射干(I.domestica)杂交F2代群体(n=61)中每一个体的株高、花径、花数、花色和彩斑等14个表型性状,对F2代与双亲性状差异、群体性状变异、主要性状间遗传相关性及花色遗传变异等方面进行分析,以明确F2群体性状变异特点,指导夏季开花鸢尾育种实践。结果表明:F2代12个性状中,8个性状的观测值居于双亲之间;除花朵直径和花朵数量外,花葶长等10个性状基本均呈正态分布,属多基因控制的数量性状;性状之间存在一定相关性,外花被长与内花被长和外花被宽与内花被宽的相关度最高,相关系数分别为0.821和0.734,趋于连锁遗传;对颜色性状的分析结果表明花色和花瓣彩斑的遗传由不同基因调控,但都是由多个基因共同控制。野鸢尾×射干F2代群体的花朵直径、花朵数量、花葶长及花色变异丰富,利于大花、多花、花葶矮生和奇异花色的优良单株的选择。

静悄悄的变革——噪声消减技术让声音更清晰 静悄悄的变革——噪声消减技术让声音更清晰

静悄悄的变革——噪声消减技术让声音更清晰

格式:pdf

大小:495KB

页数: 2页

为了节省成本及时间,人们在业务及个人生活中进行面对面的会议或会谈的频率不比以前了。手机及网络电话(VoIP)已经成为人们彼此交流方式产生这样重要变化的推动力量。在语音通信方面,要确保提供良好的用户体验,声音品质及噪声抑制至关重要。如今,人们很少体验到真正的安静,而且我们已经对噪声变得如此习惯,以至于大多数人甚至不会注意

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