黄酮类化合物中常含有下列结构单元,故常可与铝盐、铅盐、诸盐、镁盐等试剂反应,生成有色络合物。
1.铝盐 常用试剂为 1%三氯化铝或硝酸铝溶液。生成的络合物多为黄色,并有荧光,可用于定性及定量分析。
2.铅盐 常用工%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液,可生成黄至红色沉淀。
黄酮类化合物与铅盐生成沉淀的色泽,因羟基数目及位置不同而异。其中,醋酸铅只能与分子中具有邻二酚羟基或兼有3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基结构的化合物反应生成沉淀。但碱式醋酸铅的沉淀能力要大得多,一般酚类化合物均可与其发生沉淀,依此不仅可用于鉴定,也可用于提取及分离工作。
3.锆盐 多用2%二氯氧锆甲醇溶液 黄酮类化合物分子中有游离的3-或5-羟基存在时,均可与该试剂反应生成黄色的锆络合物。但两种锆络合物对酸的稳定性不同。3-羟基,4-酮基络合物的稳定性比5-羟基,4-酮基络合物的稳定性强(仅二氢黄酮醇除外)故当反应液中接着加入枸椽酸后,5-羟基黄酮的黄色溶液显著褪色,而3-羟基黄酮溶液仍呈鲜黄色(锆-枸椽酸反应)。方法是取样品 0.5~1.0 mg,用10.0 ml甲醇加热溶解,加1.0ml2%二氯氧锆( ZrOCl2)甲醇液,呈黄色后再加入2%枸椽酸甲醇溶液,观察颜色变化。
上述反应也可在纸上进行,得到的锆盐络合物多呈黄绿色,并带荧光。
4.镁盐 常用醋酸镁甲醇溶液为显色剂,本反应可在纸上进行。试验时在纸上滴加
一滴供试液,喷以醋酸镁的甲醇溶液,加热干燥,在紫外光灯下观察。二氢黄酮、二氢黄酮醇类可显天蓝色荧光,若具有C3-OH,色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则显黄-橙黄-褐色。
5.氯化锶(SrCl2)
在氨性甲醇溶液中,氯化锶可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色至棕色乃至黑色沉淀。
具有邻二酚羟基的黄酮类化合物与SrCl2的反应试验时,取约1.0 mg检品置小试管中,加入1.0 ml甲醇使溶(必要时可在水浴上加热),加入3滴0.01 mol/L。氯化铝的甲醇溶液,再加3滴已用氨蒸气饱和的甲醇溶液,注意观察有无沉淀生成。
6.三氯化铁 三氯化铁水溶液或醇溶液为常用的酚类显色剂。多数黄酮类化合物因分子中含有酚羟基,故可产生阳性反应,但一般仅在含有氢键缔合的酚羟基时,才呈现明显反应。
(三)硼酸显色反应
当黄酮类化合物分子中有下列结构时,在无机酸或有机酸存在条件下,可与硼酸反应,生成亮黄色。显然,5-羟基黄酮及2-羟基查耳酮类结构可以满足上述要求,故可与其他类型区别。一般在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光,但在枸椽酸丙酮存在的条件下,则只显黄色而无荧光。