用卵白蛋白诱发大鼠免疫复合物性肾小球肾炎模型〔6,7〕,取模型组和对照组大鼠肾脏,按上述方法制取复型膜,透射电镜观察。结果如图1~6所示,用QF-DE技术所观察到的组织细胞的三维超微结构不仅清晰逼真,而且可以揭示一些普通电镜技术难以揭示的现象。应用EikofD-2A型冷冻蚀刻装置完全可以做出高质量的QF-DE复型膜。因此,在没有足够资金购买新型冷冻蚀刻装置前,应用国内现有的EikofD-2A型冷冻蚀刻装置探讨组织细胞接近生活状态的三维超微结构是可行的。

普通电镜标本制作过程存在的缺点可概括如下:①化学固定引起细胞内物质移动及微细构造的改变,特别是不可避免地引起以钠为主的电解质及金属离子的移动及流出;②化学固定引起组织结构变形,如细胞内的细胞骨架及许多可溶性蛋白质相互架桥;③脱水引起脂质等细胞内物质丢失;④包埋、聚合过程使本来含有多量水分的细胞陷于过干状态;⑤透射电镜观察需将本来直径约10μm的立体的细胞切成0.05~0.1μm的薄片,故电镜下所看到的不是三维结构而是二维结构;⑥醋酸铀和铅盐染色沉淀增加了人工产物。

QF-DE技术是将含有大量水分的组织细胞轻微固定,或新鲜标本不固定,在液氮中用纯铜块压迫促其迅速冷冻,或在异戊烷-丙烷混合液中迅速冷冻,使其从组织表面深约10~20μm范围内形成玻璃化状态。与以前的冷冻法相比,冷冻速度快,因而称之为急速冷冻。冷冻后的组织在高真空状态下,使温度上升至100℃左右,目的是将固态的水分绕过液态而迅速升华,组织内的冰得以消融,遂使细胞膜以及细胞内外的固有构造得以更清楚地暴露出来。这一使存在于细胞内外的冰在真空状态下充分升华的过程称为深度蚀刻。与冷冻蚀刻法相比,QF-DE法有如下特点:①不用或少用化学固定,因而减少人为引起的组织细胞超微结构的变化;②冷冻速度快,能捕捉到瞬间的形态学变化;③由于不使用防冻剂,蚀刻深,不仅能观察膜的疏水面,而且能观察亲水性的膜表面及细胞内外的三维超微结构。

QF-DE法是电镜领域新技术之一,可用于观察组织细胞接近生活状态的三维超微结构,分辨率高,尤其适用于观察细胞骨架和细胞外基质,具有广阔的应用前景。近年来,用QF-DE技术所进行的研究,获得了许多常规电镜所无法得到的超微结构新知识。迄今的研究多用于动物组织,期待今后用于人体组织,相信会得到许多有价值的资料。