抗原抗体反应

本方法中抗原抗体反应类型与酶发光免疫测定技术一致，主要也有双抗体夹心法，双抗原夹心法和固相抗原竞争法三种模式。现已临床上常用的HBsAb的含量测定采用的双抗体夹心法举例:生物素标记的HBsAg , 三联吡啶钌络合物标记的HBsAg与待测样品共同孵育, 形成三联吡啶钌-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素的复合体; 和亲和素标记的磁微粒孵育, 形成三联吡啶钌-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素-亲和素磁微粒复合体。

B和F分离

常用磁颗粒分离技术。蠕动泵将反应液吸入流动室, 磁微粒由磁铁吸附到电极表面。

电化学发光反应与结果计算

蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。该过程在电极表面周而复始的进行，产生许多光子，由光电倍增管检测光强度，光强度与三联吡啶钌的浓度呈线性关系，根据标准曲线算出待测抗原的含量。最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。

方法学评价

三联吡啶钌在电场中因不断的得到三丙胺提供的电子，而周而复始地发光，持续时间长，信号强度强，容易测定，容易控制。标记物的循环再利用，使发光强度更强、时间更长、更易于测定。三联吡啶钌直接标记抗原或抗体，结合稳定，不影响标记物的理化特性，标记物的稳定性好。本法具有灵敏度高(可达pg/ml水平)、线性范围宽、反应时间短等特点。