组培材料:银叶桉的无菌实生苗胚根、叶片、茎段。
培养条件:种子萌发培养基:⑴MS培养基或1/2MS培养基。愈伤组织诱导培养:⑵MS 6-BA1毫克/升 2,4-D0.2毫克/升 NAA0.5毫克/升;⑶MS 6-BA1 2,4-D0.2毫克/升 NAA0.3毫克/升;⑷小时 KT1 2,4-D1。分化培养基:⑸MS 6-BA1 NAA0.5毫克/升;⑹MS 6-BA1 NAA0.3毫克/升;⑺小时 6-BA1 NAA0.5毫克/升;⑻小时 6-BA1 NAA0.3毫克/升。丛芽增殖、继代培养基:⑼MS 6-BA1 NAA0.5-1.0毫克/升;⑽小时 6-BA1 NAA0.5-1.0毫克/升。生根培养基:⑾1/2MS NAA1.0毫克/升。以上培养基均加0.9%琼脂,3%蔗糖。生根培养基加0.85%琼脂,15%蔗糖,pH5.6-5.8。培养温度22-28℃,光照10小时/天,光照度1500-2000勒克斯。
种子萌发与愈伤组织、不定芽诱导:银叶桉种子用清水浸泡6小时后,置于1:50倍次氯酸钠溶液消毒5分种,无菌水冲洗5-8次;再用0.1%氯化汞消毒3分种,无菌水冲洗5-8次。最后用无菌滤纸或纱布吸干水份,接种到培养基⑴中。4天后种子开始萌发,20天后小苗高约1.5厘米,子叶展开,长出一对真叶,将胚根、叶片、带顶芽茎段切下,胚根、叶片分别接种于⑵-⑷中;带顶芽茎段接种于⑸-⑻中。10天后⑵-⑷中的胚根、叶片膨大、增厚,形成愈伤组织。其中胚根愈伤组织最活跃,生长最快。30天左右,⑵、⑶中的愈伤组织生长量大,质地紧密、颜色鲜红、切块继代,1周后体积即可增加1倍;而⑷中的愈伤组织较为疏松,颜色较淡,多呈粉红色或白色,继代增殖速度较慢。将⑵-⑷培养基中生长旺盛,颜色鲜亮的愈伤组织块及时转入分化培养基⑸-⑻中,1周后愈伤组织上出现绿点,逐渐分化出绿芽,老化的愈伤组织变黑死亡。20天后小苗不断长出,形成丛芽。其中⑹、⑻培养基更利于分化出苗;⑸、⑺培养基部分愈伤组织块分化出根丛,无法分化出芽。
不定芽的增殖:接种于⑸、⑻的带顶芽茎段,基部先形成愈伤组织,1月左右,芽从茎段基部的愈伤组织或叶芽长出。将丛芽分割、小苗切段,以月为周期反复转入⑼、⑽中,月增殖率可达4-5倍,以⑼增殖、生长效果最好,⑽中的苗较矮小、纤细。
生根与炼苗:将⑸-⑽中,高约1.5厘米左右粗壮的苗切下,接入⑴中,1周即开始发根。15-20天后,生根苗根量1-4条,根长约1.5厘米,生根率可达60%。生根后小苗迅速长高,至30天,苗高平均3厘米,此时取出小苗,用清水洗去根部琼脂,移植于消毒的珍珠岩中,覆盖塑料薄膜、遮光网,保持90%以上湿度,1周后逐渐揭膜锻炼,45天后炼苗成活率可达80%以上。
播种:于11-12月采种,次年春播,也可在7-8月采种,当年播种。种子发芽率达90%以上。
母床育苗:选择土壤肥沃的菜园地做苗床地,在3月中旬播种,精细整地理墒,墒宽1.2-1.6米。将种子浸泡48小时后,用细沙拌匀种子撒播于苗床上,用细粪土覆盖1-2厘米厚。浇足水后盖膜,播后7-10天可出土,土壤保持湿润、通风,防止高温烧苗。当小苗长至5-10厘米高时,揭膜炼苗;苗长到30-40厘米高时,宜选阴雨天移栽,易成活。在中国云南中部地区于6月上旬至7月上旬移栽最佳。
营养袋育苗:营养土装袋后,将浸泡好的种子播于袋中(每袋2-3粒),再覆盖一层细粪,浇足水后盖膜,注意通风和保持水分。在小苗成长期间定苗,拔出弱小苗,每个营养袋留1株。待小苗长至10-20厘米高时可以移栽,一般3月上旬育苗,6月上旬雨季进行移栽。
苗床管理:待幼苗出苗后,拔除苗床的所有杂草。