获取三维荧光光谱，最简单的办法是用一般的荧光分光光度计，分别测定各个不同激发波长下荧光发射光谱。例如，激发波长每增加或减少10nm即测绘一次发射光谱。然后利用所获得的一系列光谱数据，绘制三维投影图或等高线光谱图。这样的方法较麻烦，在缺少先进设备的情况下可采用。较一般的办法是应用微机控制的自动扫描记录荧光分光光度计，每次在保持一定的激发波长增量条件下，重复进行发射光谱扫描，并将所测取的荧光强度信号输入计算机进行数据处理和作图。更为先进的测取三维荧光光谱的方法是利用电视荧光计。它是由正交多色器、电视检测器和电子计算机接口等部件所组成，能自动获得三维荧光光谱图。
