所述制作步骤为：
（1）母种的活化培养步骤：菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，将安瓿管中的菌株接种于PDA培养基上进行培养；PDA培养基为常用的真菌培养基（200克马铃薯切片加入1000毫升水煮沸20分钟，过滤后加入20克葡萄糖和15～18克琼脂加热溶解，再次过滤最终体积为1000毫升，后经121℃/0.1兆帕进行20分钟高压灭菌而成）；培养温度为22～24℃；当菌丝长满培养基时，培养完毕，将活化培养完的母种切成12～15毫米的小块切片，备制备原种的预培养步骤使用。
（2）制备原种的预培养步骤：所述制备原种的预培养步骤中：采用的原种培养基为，均按照质量份数：21份的新鲜棉籽壳、8份牛粪、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水发酵14～16天后，晒干后，34～36份发酵棉籽壳加入1～2份蛭石、1～2份膨胀珍珠岩、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均匀即成为原种培养基；将装有原种培养基的容器在高压灭菌锅内进行高压灭菌，在126℃/0.15兆帕进行80～120分钟的灭菌处理，灭菌后，使其冷却至常温，将母种切片投入预培养容器进行接种；预培养温度为22～24℃，预培养18～22天；所述预培养容器采用1000毫升的带过滤呼吸盖的塑料广口瓶，并按照1000毫升的预培养容器中装入900毫升的原种培养基，每个预培养容器中接种1～3个切片。
（3）正式培养步骤培养：
a）所述小麦培养基调质的整个过程在旋转蒸煮锅中进行，往旋转蒸煮锅加入占旋转蒸煮锅容积40％的小麦培养基，其中按照质量份小麦82～91份，膨胀珍珠岩5～10份，轻质碳酸钙2～4份和石膏2～4份；关闭进料口，让旋转蒸煮锅旋转五分钟，让各种材料混合均匀后，再通过进料口注入占旋转蒸煮锅容积20％的水；最后再关闭进料口，打开进汽阀门，通入高压蒸汽，对旋转蒸煮锅内小麦培养基进行蒸煮，蒸煮温度110℃，压力0.08兆帕，维持15～20分钟，蒸煮结束的小麦培养基倒出进行摊晾冷却，冷却至室温；
b）小麦培养基的装袋、灭菌：将小麦培养基装入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋长宽厚规格为：630毫米×360毫米×80微米，带有2个35毫米×35毫米呼吸膜，装入6千克的小麦培养基或495×320毫米×60微米，带有1个35毫米×35毫米呼吸膜，装入3千克的小麦培养基；并将呼吸塑料袋装入杀菌车采用高压灭菌锅在126℃/0.15兆帕下进行灭菌处理，高压灭菌时将为120～150分钟；并在高压灭菌锅中冷却至室温；
c）小麦培养基接种：在洁净度为10000级的缓冲间、洁净度为1000级的接种室里，放入洁净度为100级超净工作台进行接种操作；接种量为每个呼吸塑料袋（6千克）接入180～230毫升的原种或者每个呼吸塑料袋（3千克）接入90～120毫升的原种，接种后，用封口机将呼吸塑料袋封口，并进行翻袋混合，翻袋次数10～15次；在培养温度为20～23℃下培养13～16天后，待呼吸塑料袋长满菌丝正式培养完毕，将装有菌种的呼吸塑料袋移入3±1℃冷库保藏，大袋蘑菇栽培种制作完成。
以上小麦培养基的灭菌采用的高压灭菌锅，是在常规的卧式高压灭菌锅上进行改进，即在卧式高压灭菌锅的锅体设置抽真空系统和空气净化系统：所述锅体上设置的抽真空系统包括真空泵，所述真空泵通过阀门由三通管道一端连接锅体，该三通管道的另一端设置一阀门作为排气孔；所述空气净化系统包括空压机，所述空压机通过一阀门由管道连接一空气过滤器；所述空气过滤器通过一阀门由管道连接锅体，该阀门与锅体间的管道上设置有一安全阀。
结合附图5说明高压灭菌锅的使用方法为：将小麦培养基在所述高压灭菌锅体48中按照常规高压灭菌操作进行灭菌处理，灭菌结束后，关闭蒸汽进气阀门54，停止通入蒸汽，立即启动真空泵68，同时打开真空泵处阀门70，通过真空泵68直接排出湿热空气，当锅体的压力表64上的示数降到0.05兆帕，立即关闭真空泵68和真空泵处阀门70，同时启动空压机52，打开空压机处阀门51和空气过滤器处阀门56，通过空气过滤器50向高压锅锅体48内吹入洁净空气，防止杂菌进入锅体，进而进入呼吸塑料袋中，再缓缓打开排气孔处阀门60，通过排气孔62直接排出湿热空气，保持锅体48的压力表64为正压；冷却至室温，通过锅体48上的温度计66观察温度。
优异效果对比数据
表1中，对传统使用的瓶装栽培种和用上述方法制作的大袋蘑菇栽培种进行比较
*注：每个呼吸塑料袋可装麦粒菌种6千克或3千克，相当于750毫升玻璃瓶麦粒菌种15瓶或8瓶
表1中以容量为6千克呼吸塑料袋为例，对瓶装生产蘑菇栽培种和使用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种，具备较大差异的部分进行了总结。
实施例
在蘑菇的大袋栽培种制作中，分为三步进行，首先是由保存菌株进行活化培养获得母种，称为活化培养步骤S1，其次将母种进行扩繁培养获得原种，称之为预培养步骤S5，最后将预培养获得的原种接入装有小麦培养基（湿重6千克）的呼吸塑料袋30中，在所述小麦培养基中进行培养栽培种，称为正式培养步骤S9，上述呼吸塑料袋30装入小麦培养基后，均要在高压灭菌锅中作高压灭菌，然后使小麦培养基和呼吸塑料袋30冷却至室温，再把预培养后获得原种接入至上述塑料参考附图对该实施例进行详细说明。
《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种》的蘑菇大袋栽培种制作方法的特征是，包括母种的活化培养步骤，制备原种的预培养步骤，以及将原种接入大袋栽培种的正式培养步骤。以下，依次对母种的活化培养步骤、制备原种的预培养步骤和接种大袋栽培种的正式培养步骤进行说明。
图1-3是用于蘑菇菌种的母种活化培养步骤、原种的预培养步骤和大袋栽培种的正式培养步骤的说明图。
图1表示母种的活化培养步骤。该图中，10表示从液氮保藏罐取出的安瓿管，装有保存菌株。首先将安瓿10中的菌株接种于PDA培养基12。PDA培养基12的为常用的真菌培养基（200克马铃薯切片加入1000毫升水煮沸20分钟，过滤后加入20克葡萄糖和15～18克琼脂加热溶解，再次过滤最终体积为1000毫升，后经121℃/0.1兆帕进行20分钟高压灭菌而成）。步骤S1为PDA培养基12中的母种的活化培养步骤。该实施状态中制作的是双孢蘑菇菌种。步骤S1的活化培养步骤中的培养温度为22～24℃。
14表示在PDA培养基12种继续进行母种的活化培养状态。继续进行培养后，蘑菇菌丝长满PDA培养基。16表示在PDA培养基12上培养完毕。切片18表示活化培养的母种切片状态。预培养时使用切成12～15毫米的小块的多个切片18。
图2表示原种的预培养步骤。预培养是指在较大的容器内制备原种的预培养步骤。
20为培养原种的容器。该实施状态中，装有原种培养基的容器20是1000毫升的带过滤呼吸盖的塑料广口瓶。采用的原种培养基为，均按照质量份数：21份的新鲜棉籽壳、8份牛粪、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水发酵14～16天后，晒干后，34～36份发酵棉籽壳加入1～2份蛭石、1～2份膨胀珍珠岩、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均匀即成为原种培养基。
步骤S2是对装入容器20的原种培养基进行灭菌的步骤。该实施状态中，高压灭菌锅用作高压灭菌，在126℃/0.15兆帕进行80～120分钟的灭菌处理。
步骤S3是对原种培养基进行灭菌后，使其冷却至常温的步骤。
步骤S4是在原种培养基中接种预先用PDA培养基12制得的母种的步骤。将前述培养后的PDA培养基12的1～3个母种切片18投入容器20种进行接种。
步骤S5是使接种了母种的原种培养基进行培养的步骤。该实施状态中培养温度为22～24℃，培养18～22天，该步骤称为预培养步骤。
通过预培养完成原种的预培养后，进入正式培养。
图3表示正式培养步骤。正式培养中，使用装有小麦培养基的呼吸塑料袋30，将预培养中获得的原种接种于小麦培养基进行培养。呼吸塑料袋30在该实施状态采用600毫米×300毫米×80微米（长:宽:厚），可装入6千克的小麦培养基，带有2个35毫米×35毫米呼吸膜32或495×320毫米×60微米（长:宽:厚），可装入3千克的小麦培养基，带有1个35毫米×35毫米呼吸膜32。
正式培养过程中，首先，要对装入呼吸塑料袋30的小麦培养基进行调制，图4表示旋转蒸煮锅构造，这个过程要在旋转蒸煮锅34内完成，通过进料口36往旋转蒸煮锅34加入旋转蒸煮锅34容积40％的小麦培养基（其中按照质量份小麦82～91份，膨胀珍珠岩5～10份，轻质碳酸钙2～4份和石膏2～4份）。然后关闭进料口36，让旋转蒸煮锅34旋转五分钟，让各种材料混合均匀后，再通过进料口36注入水（旋转蒸煮锅34体积的20％）。最后再关闭进料口36，打开进汽阀门42，通入高压蒸汽，由出汽喷头44对旋转蒸煮锅34内小麦培养基进行蒸煮，通过观察温度计38和压力表40，来对进汽阀42进行高压蒸汽调节，该实施状态中蒸煮温度110℃，压力0.08兆帕，维持15～20分钟，整个蒸煮过程的时间大概在40分钟，蒸煮结束后小麦由出料口46倒出进行摊晾冷却，冷却时室温后装入呼吸塑料袋30。
步骤S6是对装入呼吸塑料袋30的小麦培养基进行灭菌的步骤。该灭菌步骤采用的是高压灭菌。该实施状态中，使用如具体实施方式中描述的改进的高压灭菌锅，在高压灭菌锅中推入装着呼吸塑料袋30的杀菌车72，对呼吸塑料袋30进行高压灭菌。该实施状态中，在126℃/0.15兆帕进行120～150分钟的灭菌处理。
步骤S7是使灭菌后的呼吸塑料袋30冷却至室温的步骤。该冷却步骤中，如图5所示，最好在灭菌结束后，将小麦培养基在所述高压灭菌锅体48中按照常规高压灭菌操作进行灭菌处理，灭菌结束后，关闭蒸汽进气阀门54，停止通入蒸汽，立即启动真空泵68，同时打开真空泵处阀门70，通过真空泵68直接排出湿热空气，当锅体的压力表64上的示数降到0.05兆帕，立即关闭真空泵68和真空泵处阀门70，同时启动空压机52，打开空压机处阀门51和空气过滤器处阀门56，通过空气过滤器50向高压锅锅体48内吹入洁净空气，防止杂菌进入锅体，进而进入呼吸塑料袋中，再缓缓打开排气孔处阀门60，通过排气孔62直接排出湿热空气，保持锅体48的压力表64为正压；冷却至室温，通过锅体48上的温度计66观察温度，进入随后的栽培种接种阶段。
步骤S8为冷却后，将预培养步骤制得的原种接种到呼吸塑料袋30的小麦培养基中的步骤。接种栽培种时，为了不混入杂菌，必须十分小心。该实施状态中，在洁净度为10000级的缓冲间、洁净度为1000级的接种室里，放入洁净度为100级超净工作台进行接种操作。该实施状态中，接种量为每个呼吸塑料袋（6千克）接入180～230毫升的原种或者每个呼吸塑料袋（3千克）接入90～120毫升的原种，接种后，呼吸塑料袋30马上用封口机进行热熔封口，并将原种和小麦培养基在呼吸塑料袋30里进行翻袋混合，该实施状态中，翻袋次数10～15次。
步骤S9为接种原种的小麦培养基进行培养的步骤。46为装着接种过原种的培养基的呼吸塑料袋，且原种和小麦培养基完全混合。该实施状态中培养温度为20～25℃，培养13～16天，待呼吸塑料袋长满菌丝正式培养结束，该步骤称为正式培养步骤。
步骤S10为正式培养后的大袋栽培种装箱后移入冷库保藏，大袋蘑菇栽培种制作完成。
