常用分株繁殖。春季结合换盆,将茎基萌生的幼株分离后单独植入盆内。
材料类别
笹之雪的茎尖和叶片。
培养条件
诱导培养基:①MS 6-BA2.0毫克/升 NAA0.2毫克/升;②MS 6-BA2.0毫克/升 KT1.0 NAA0.2毫克/升;③MS 6-BA1.0毫克/升 KT1.5毫克/升 NAA0.2毫克/升。
增殖培养基:④MS 6-BA0.5毫克/升 KT1.0 NAA0.2毫克/升。
生根培养基:⑤MS KT1.5毫克/升 NAA0.5毫克/升。
所有培养基均附加30克/升的蔗糖和7克/升的琼脂,pH5.8。培养温度为(25±2)℃,除叶片诱导的前15天采用暗培养外,其他阶段均以日光灯为光源进行光照培养,每天连续光照10-12小时,光照强度为30-40微摩尔/平方米/秒。
无菌材料的获得
以笹之雪的幼嫩侧芽为材料,自来水冲洗干净,饱和洗衣粉水浸泡5-10分钟,流水冲洗1小时,移到超净工作台上用75%的酒精消毒30秒,无菌水冲洗1-2次,再用0.2%升汞消毒5分钟(滴加2-3滴吐温-80),然后用无菌水冲洗4-5次,每次冲洗时间2-3分钟,无菌滤纸吸干水分。剥下材料外围的2-3张叶片(每片叶平均分成叶顶、叶中、叶基三部分)和带有1个小叶的茎尖。
愈伤组织及芽的诱导
将茎尖接种在培养基①上,叶片各部分接种在培养基②上。在培养基①上接种15天后茎尖基部膨大,25天后有新芽萌动,40天时分化率达100%,增殖系数达4.6。在培养基②上接种15天后,叶基的切口处明显膨大,20天后,开始产生少量绿色愈伤组织,50天时诱导率达100%,并且产生少量不定芽;叶中、叶顶20天后切口处开始膨大,30天后开始形成少量淡绿色的愈伤组织,50天时愈伤组织诱导率分别达到98%和89%,但未见不定芽产生。将叶片诱导产生的愈伤组织接种在培养基③上,30天时绿色愈伤组织的分化率达100%,不定芽粗壮,叶色浓绿,淡绿色愈伤组织上未见不定芽产生。
继代增殖和生根壮苗
将上述诱导的不定芽接种在培养基④上,35天左右可增殖一代,增殖系数达5.47,增殖芽有高有矮,密度适中,小苗粗壮,有效苗多。将继代增殖获得的不定芽转移至培养基⑤上进行生根培养,15天时切口处开始膨大30天时已长出少量粗短根,40天时根系多且长,生根率达100%。