组培材料:中华短肠蕨根状茎茎尖。
外植体的灭菌消毒与接种:取2厘米长的根状茎茎尖,去掉杂质及茎尖周围的绒毛等附属物,洗净,用流水冲洗2-3小时,在超净工作台上,先用70%酒精处理30-60秒,用无菌水冲洗2-3次,再用0.02%的升汞加少许表面湿润剂吐温的消毒液消毒5分钟,然后用用无菌水冲洗3-5次,取出茎尖切取1厘米长保持极性接种于培养基表面。
培养基的配制与灭菌:以MS培养基为基本培养基。中华短肠蕨的根状茎茎尖的培养常用MS培养基,以浓度为0.5毫克/升时,对根的生长发育最适合。BA(1.0毫克/升)NAA(0.1毫克/升),此时产生的芽数最多,芽生长较快,芽粗,生长茁壮。培养基和培养容器的灭菌采用高压湿热消毒法,即将分装好的培养基、培养皿等实验器具置于D-1型自动蒸汽灭菌锅内,在温度为121℃、压力为1千克/立方厘米的环境中灭菌15-20分钟。
接种:以MS培养基为基本培养基,NAA浓度对根系的生长影响较大,以浓度为0.5毫克/升时,适合根的生长发育。BA(1.0毫克/升)NAA(0.1毫克/升)时产生的芽数最多,芽生长较快,芽粗,生长茁壮。
试管苗的移栽:当根长到3-4厘米、茎高4-5厘米时,将瓶盖打开,将培养容器在自然条件下培养7天左右,然后打开盖子,于室内自然光照下再放3天,然后用镊子轻轻取出幼苗,用自来水将根系上的琼脂冲洗干净,再用0.01%高锰酸钾浸泡3-5分钟,稍微晾干后移栽到用1%高锰酸钾溶液消毒过的泥炭土和蛭石(2:1)混合土中,湿度保持在90%以上,薄膜覆盖1周后揭膜,成活率在90%以上。移栽时,最适温度控制在25℃左右,超过28℃以上容易引起烂苗。