1、氨基酸的甲醛滴定（formal titration）
氨基酸虽然是一种两性电解质，即是酸性又是碱性，但它却不能直接用酸碱滴定来进行测量。这是因为氨基酸的酸碱滴定的等电点pH过高（12-13）或是过低（1-2）没有适合的指示剂可备选用。而向氨基酸中加入过量的甲醛，用氢氧化钠滴定时，由于甲醛可与氨基酸上的—N H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2等羟甲基衍生物，而降低了氨基酸的碱性，相对增强了—N H3的解离，使滴定终点移到了pH9附近，在酚酞指示剂的变色区域内，能够用酚酞作为指示剂进行滴定。
以上出自《生物化学》（高等教育出版社 2006.5，王镜岩等主编）
甲醛滴定法测定氨基酸含量
目的
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
原理
水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物，使N H3上的H 游离出来，这样就可以用碱滴定N H3放出H ，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
材料、试剂与器具
（一）试剂
1、0.5%酚酞酒精溶液
称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液
取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%甘氨酸溶液
取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。
4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液
5、中性甲本醛溶液
取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具
1、锥形瓶 2、碱式滴定管
3、 移液管洗耳球 4、天平
5、容量瓶 6、试剂瓶
7、量筒 8、玻棒与烧杯
1、取3只100ml锥形瓶，按下表加入试剂
| 锥形瓶编号 试剂 |
样品1 |
样品2 |
空白 |
| 1%甘氨酸溶液或样品（ml） |
2.0 |
2.0 |
— |
| 蒸馏水（ml） |
5.0 |
5.0 |
7.0 |
| 中性甲醛溶液（ml） |
5.0 |
5.0 |
5.0 |
| 0.05%溴麝香草酚蓝溶液（滴） |
2 |
2 |
2 |
| 0.5%酚酞乙醇溶液（滴） |
4 |
4 |
4 |
2、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）
3、结果计算
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）；
V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；
1.4008 为1ml 0.1mol/L氢氧化溶液相当的氮量（mg）
利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。
