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辣根过氧化酶使试剂中的发光物(luminol)氧化并发光,而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中,将复杂的蛋白混合物经sds-page分离,并转移到固相膜上(如nc、pvdf)等,用于免疫学检测,经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接(标记一抗)或间接(标记二抗)反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后,luminol发生氧化降解,并发射波长为428nm的光,此光可经x光胶片(放射自显影片)感光记录下来。
Chemiluminescent
非放射性发光系统,用于检测固定在膜上的蛋白,其敏感性达1-5pg。用x光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持12小时以上的发光,便于反复曝光操作,免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。
围绕原子核运动的电子从一个轨道跳跃到另一个轨道时,会吸收或释放电磁波,释放电磁波的频率在可见光波范围内时,我们就会看到可见光。
荧光灯管发光原理:普通的荧光灯系由灯管、镇流器、启辉器等组成。灯管是一根15^-38毫米直径的玻璃管,在管内壁上涂上一层荧光粉,灯管两管各有一个灯丝。灯丝由钨丝绕成,用以发射电子。管内在真空情况下充有...
1. 印迹膜制备 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作,适当的封闭非常重要。可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP,一般采用市售的HRP二抗交联物。仔细地淋洗对于降低背景非常重要,在与HRP交联物温育后,膜片更需仔细洗涤,所有步骤均在室温下完成。
2. 化学发光试剂的配置 在使用前等量混合a液和b液,混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。
3.蛋白信号显现
1). 用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。
2). 置膜片于二层保鲜膜之间,小心赶尽气泡。
3). 将膜片吸附蛋白面朝上,置于x光片盒中。
4). 于暗室中压上x光片。
5).根据信号的强弱适当调整曝光时间,一般为1min或5min,也可选择不同时间多次压片,以达最佳效果。显影冲洗。
6). 调节曝光时间,再次曝光显影。
4、膜的重复使用:
配置62.5mm tris-hcl,ph6.7,2%sds, 7ml/100ml的巯基乙醇的溶液,膜放入后,70?c振荡水浴30分钟。再用tbst或pbst缓冲液洗脱,最后用bsa(牛血清白蛋白)或牛奶封闭。
1. 试剂每个批号均独立优化,请不要混用或稀释试剂以免降低敏感性;
2. 加入一抗后膜不能再干燥;
3. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要;
4. 使用前配置化学发光试剂,配置足够覆盖膜片即可,弃去使用过的混合试剂;
5. 使用干净取样头取用每种试剂;
6. 第一张片子建议曝光1分钟,观察结果后判断最佳曝光时间可从30秒至2小时不等;
7. 除了放射自显影片曝光和洗片处理外,所有步骤均不必在暗室中操作;
8. 膜片可经适当方法洗脱原有抗体,再次印迹使用,在此情况下,此试剂更为理想;
9. 因为它不象生色物质需要从膜片上清除底物。
10. nan3能抑制HRP活性,应避免使用nan3。
无特殊毒性,按普通化学品处理。如果不慎与眼、皮肤和衣物接触,请立刻用大量清水冲洗。
2-8℃密封避光保存一年。
LED光诱导化学发光法检测饮料中的核黄素
以化学发光法为基础,建立了以发光二极管(LED)诱导化学发光体系(LED-CL)检测饮料中核黄素含量的分析方法。样品溶液与鲁米诺溶液混合后由蠕动泵带出,经LED灯照射后产生化学发光,产生的化学发光信号由光电检测器检测。核黄素浓度检测线性范围为0.39~79.56μg/L(R≥0.999 7),加标回收率为99.3%~103%,可用于饮料中核黄素的检测。
离子印迹聚合物在线分离富集-流动注射-化学发光法测定铜
研究了以铜(Ⅱ)离子作为模板离子,合成了铜(Ⅱ)离子印迹聚合物并将其做成固相萃取柱,直接安装在流动注射系统上,对样品中的铜(Ⅱ)离子进行在线分离富集;经H2SO4+乙醇混合溶液洗脱液在线洗脱后。在H2SO4介质中,铜(Ⅱ)离子催化高锰酸钾氧化桑色素发生化学发光反应。据此建立了灵敏简单流动注射化学发光法测定铜的新方法。在最佳实验条件下,测定铜的线性范围为0.1~10μg.mL-1,相关系数r=0.996 8,方法检出限为0.001 2μg.mL-1,对4.0μg.mL-1铜进行9次测定的相对标准偏差小于3%,加标回收率在95%~105%之间,方法用于样品中铜的测定,结果满意。