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用电化学发光剂三联吡啶钌[ Ru(bpy)3]标记抗体,通过抗原抗体反应和磁颗粒分离技术,根据 三联吡啶钌在电极上发出的光强度的大小对待测抗原或抗体进行定性或定量分析。
电化学发光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA)是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。 其标记物的发光原理是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包含了化学发光(CL)与电化学发光(ECL)的两个过程。
抗原抗体反应
本方法中抗原抗体反应类型与酶发光免疫测定技术一致,主要也有双抗体夹心法,双抗原夹心法和固相抗原竞争法三种模式。现已临床上常用的HBsAb的含量测定采用的双抗体夹心法举例:生物素标记的HBsAg , 三联吡啶钌络合物标记的HBsAg与待测样品共同孵育, 形成三联吡啶钌-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素的复合体; 和亲和素标记的磁微粒孵育, 形成三联吡啶钌-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素-亲和素磁微粒复合体。
B和F分离
常用磁颗粒分离技术。蠕动泵将反应液吸入流动室, 磁微粒由磁铁吸附到电极表面。
电化学发光反应与结果计算
蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液,同时电极加电压,启动ECL反应过程。该过程在电极表面周而复始的进行,产生许多光子,由光电倍增管检测光强度,光强度与三联吡啶钌的浓度呈线性关系,根据标准曲线算出待测抗原的含量。最后,终止电压,移开磁珠,加入清洗液冲洗流动测量室,准备下一个样品测定。
方法学评价
三联吡啶钌在电场中因不断的得到三丙胺提供的电子,而周而复始地发光,持续时间长,信号强度强,容易测定,容易控制。标记物的循环再利用,使发光强度更强、时间更长、更易于测定。三联吡啶钌直接标记抗原或抗体,结合稳定,不影响标记物的理化特性,标记物的稳定性好。本法具有灵敏度高(可达pg/ml水平)、线性范围宽、反应时间短等特点。
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